研究快报
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世界华人消化杂志. 2009-03-08; 17(7): 699-704
Published online 2009-03-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i7.699
靶向ASGPR1的外源性microRNA对HBV表达和复制的抑制作用
郜玉峰, 余莉, 李家斌, 魏少峰, 李旭, 沈继龙
郜玉峰, 李家斌, 魏少峰, 李旭, 安徽医科大学第一附属医院感染病科 安徽省合肥市 230032
郜玉峰, 余莉, 沈继龙, 安徽省人兽共患病实验室, 教育部省部共建重点实验室(安徽医科大学) 安徽省合肥市 230022
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30700698.
作者贡献分布: 此课题由沈继龙, 李旭及郜玉峰设计; 研究过程由郜玉峰, 余莉, 李家斌, 魏少峰及李旭完成, 数据分析由郜玉峰和余莉完成, 本论文写作由郜玉峰和沈继龙完成.
通讯作者: 沈继龙, 教授, 230022, 安徽省合肥市, 安徽省人兽共患病实验室. shenjilong53@126.com
电话: 0551-5161057
收稿日期: 2008-12-25
修回日期: 2009-01-30
接受日期: 2009-02-09
在线出版日期: 2009-03-08
Abstract

目的: 设计并构建ASGPR1靶向的microRNA表达载体, 观察其对ASGPR1基因的抑制作用及其在HBV感染基因治疗中的应用价值.

方法:  以ASGPR1为靶基因, 设计并构建3个针对ASGPR1不同位点的microRNA表达载体, 通过脂质体方法转染HepG2.2.15细胞, RT-PCR和Western blot检测其对ASGPR1 mRNA和蛋白的抑制作用, 乙肝五项定量和HBV DNA检测其对HBV的抑制作用.  

结果: ASGPR1 mRNA和蛋白的平均水平分别下降了57.3%和49.8%(P<0.01); 在病毒水平3种amiRNA均能明显抑制相应细胞株中HBsAg和HBeAg的分泌, 其中以amiRNA-ASGPR1-610抑制作用最强, 对培养72 h的细胞上清中的HBsAg和HBeAg抑制率分别为31.3%和33.6%(P<0.01), HBV DNA的抑制率为29.7%(P<0.01).

结论:  靶向ASGPR1的外源性microRNA能显著抑制靶基因的表达, 进而抑制HBV的复制和表达. ASGPR1可以作为慢性HBV感染基因治疗的候选靶点.

Keywords: 乙型肝炎病毒; RNA干扰; MicroRNA; HepG2.2.15细胞