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世界华人消化杂志. 2009-12-28; 17(36): 3729-3733
Published online 2009-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i36.3729
Published online 2009-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i36.3729
特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性鉴定
别彩群, 广州医学院附属深圳沙井医院消化科 广东省深圳市 518104
杨冬华, 汤绍辉, 暨南大学附属第一医院消化科 广东省广州市 510630
丁世华, 深圳市第二人民医院消化科 广东省深圳市 518000
基金项目: 广东省科技计划基金资助项目, No. 2006B19901014.
作者贡献分布: 别彩群、杨冬华、汤绍辉及丁世华对此文所作贡献均等; 此课题由杨冬华与汤绍辉设计; 研究过程由别彩群与丁世华操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由杨冬华提供; 数据分析由别彩群与汤绍辉完成; 本论文写作由别彩群、杨冬华、汤绍辉及丁世华共同完成.
通讯作者: 别彩群, 主治医师, 518104, 广东省深圳市, 广州医学院附属深圳沙井医院消化科. looshy@yahoo.cn
电话: 0755-27722241-3819
收稿日期: 2009-10-15
修回日期: 2009-11-16
接受日期: 2009-11-23
在线出版日期: 2009-12-28
修回日期: 2009-11-16
接受日期: 2009-11-23
在线出版日期: 2009-12-28
Abstract
目的: 实现特异性抗肝癌单链抗体二聚体在毕赤酵母中高效表达、纯化并鉴定其生物学活性.
方法: 构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM, 转化感受态大肠杆菌DH5α, 选择测序正确的阳性克隆进行扩增后, 电转化酵母细胞, 表达抗体二聚体, 对表达抗体进行纯化、浓度检测, 并鉴定其对肝癌细胞的结合活性, 免疫组织化学检测二聚体对肝癌组织抗原的特异性.
结果: 测序显示成功构建酵母表达载体pGAPZαA-BDM, 表达96 h抗体收获量最大, 二聚体表达量为30 mg/L菌液, 为大肠杆菌的300倍. 抗肝癌单链抗体二聚体BDM与三种肝癌细胞结合, 而与正常肝细胞不结合, 结合效价为1:128. 免疫组织化学显示二聚体与肝癌组织结合的阳性率比肝硬化、胃癌、正常肝组织高, 差异有统计学意义.
结论: 成功制备了高表达量、高特异性、较好的活性及稳定性的抗肝癌单链抗体二聚体BDM, 为制备免疫纳米颗粒及开展肝癌的放射免疫诊断和靶向治疗奠定了基础.
Keywords: 肝癌抗体二聚体; 毕赤酵母; 结合活性; 特异性