基础研究
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世界华人消化杂志. 2009-10-28; 17(30): 3086-3091
Published online 2009-10-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i30.3086
p15INK4B和p21WAF1基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109的协同抑制作用
张学彦, 刘志强, 景德怀, 关景明, 刘伟, 刘铁夫, 刘冰熔
张学彦, 刘志强, 景德怀, 关景明, 刘冰熔, 哈尔滨医科大学附属二院消化科 黑龙江省哈尔滨市 150086
刘伟, 哈尔滨医科大学附属二院分子实验中心 黑龙江省哈尔滨市 150086
刘铁夫, 哈尔滨医科大学附属四院消化科 黑龙江省哈尔滨市 150000
张学彦, 副主任医师, 医学博士, 主要从事消化系肿瘤的防治研究.
基金项目: 黑龙江省科技计划攻关重点项目基金资助项目, No. GB05C401-09; 黑龙江省教育厅科学技术研究基金资助项目, No. 11521191; 黑龙江省卫生厅科研基金资助项目, No. 2007-304.
作者贡献分布: 此课题由张学彦与关景明设计; 研究过程由张学彦、刘志强、景德怀、刘伟、刘铁夫及刘冰熔操作完成; 研究所用试剂及分析工具部分由刘伟提供; 数据分析与论文写作由张学彦完成.
通讯作者: 张学彦, 副主任医师, 150086, 黑龙江省哈尔滨市学府路246号, 哈尔滨医科大学附属二院消化科. zxycxw@sina.com
电话: 0451-86605143
收稿日期: 2009-08-22
修回日期: 2009-09-26
接受日期: 2009-09-28
在线出版日期: 2009-10-28
Abstract

目的: 探讨p15INK4B(p15)和p21WAF1(p21)基因联合转染对人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖和凋亡的影响.

方法: 脂质体介导pcDNA3.1(+)-p15和pcDNA3.1(+)-p21转染EC109细胞, 稳定筛选后用RT-PCR检测转染细胞p15与p21基因mRNA表达, Western blot检测转染细胞P15和P21蛋白的表达. 用MTT法和透射电镜检测p15和p21基因分别及联合转染对EC109细胞增殖与凋亡的影响, 流式细胞仪检测EC109细胞周期分布与凋亡率.

结果: p15和p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组与未转染组, 联合转染组与二者单独转染组相比, 亦明显抑制EC109细胞体外生长速度. p15和p21转染组EC109细胞发生G1/S阻滞, G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组, S期则显著降低(G1期: 60.52%±3.75%, 63.12%±2.89% vs 42.17%±5.30%, 41.38%±6.54%; S期: 22.67%±1.25%, 17.96%±2.03% vs 30.96%±3.33%, 36.05%±1.78%, 均P<0.01), 并出现凋亡峰, 透射电镜亦发现p15和p21转染组发生细胞凋亡, 联合转染组发生更为明显的G1/S阻滞, G1期比例显著升高、S期比例明显降低(G1期: 72.83%±2.31% vs 60.52%±3.75%, 63.12%±2.89%; S期: 13.59%±2.59% vs 22.67%±1.25%, 17.96%±2.03%, 均P<0.05), 凋亡率明显升高(21.21%±1.78% vs 4.32±1.74%, 10.83%±2.40%, 均P<0.01).

结论: p15和p21基因联合转染在体外可以进一步增强对人食管鳞癌EC109细胞的抑制与诱导凋亡作用.

Keywords: p15INK4B; p21WAF1; 基因转染; 食管鳞癌