Published online 2009-08-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i24.2444
修回日期: 2009-08-15
接受日期: 2009-08-17
在线出版日期: 2009-08-28
目的: 探讨TGF-β1、TGF-β1R siRNA联合应用对小鼠急性肝损伤TGF-β/Smad信号传导通路的干预作用.
方法: 清洁级健康大鼠36只分为2组: 正常对照组(n = 6, 注射生理盐水)与实验组(n = 30). 实验组动物在实验第1天和第5天腹腔注射CCl4花生油溶液6 mL/kg, 造成急性肝损伤并启动TGF-β/Smad信号传导通路. 实验分为TGF-β1 shRNA干预组(T); TGF-β1 siRNA+TβRⅠshRNA干预组(T+R1); TGF-β1 shRNA+TβRⅡ siRNA干预组(T+R2); TGF-β1 siRNA+TβRⅠshRNA+TβRⅡ shRNA干预组(T+R1+R2)和模型对照组(M). 观察各实验组血清ALT、AST、HA; 肝组织学RT-PCR和免疫组织化学检测肝组织中α-SMA、COL-1、COL-3、TGF-β1、Smad3、PCNA和TGF-α mRNA及蛋白的表达.
结果: 经shRNA质粒DNA干预的4个治疗组与模型组比较, 均能显著降低血清ALT, AST及HA的水平(ALT: 592.80±98.4 IU/L, 440.80±91.9 IU/L, 461.61±120.0 IU/L, 284.00±49.0 IU/L vs 949.5±196.1 IU/L; AST: 686.80±112.3 IU/L, 591.00±99.87 IU/L, 607.50±84.8 IU/L, 398.30±61.9 IU/L vs 985.67±274.8 IU/L; HA: 5682.80±824.14 µg/L, 2871.26±394.68 µg/L, 3004.29±354.25 µg/L, 1982.12±402.71 µg/L vs 8444.65±812.15 µg/L, P<0.05)的测定值; 4个治疗组两两比较, T+R1+R2组疗效明显高于其他3组(P<0.01). 与模型组比较. shRNA质粒DNA干预能明显抑制TGF-β1, Smad3, α-SMA, COL-1及COL-3的mRNA与蛋白的表达(均P<0.05). 其抑制效果以T+R1+R2组最明显. 对蛋白水平表达的作用也有相似趋势.
结论: 针对TGF-βRⅠ及其Ⅰ型受体(TβR Ⅰ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的siRNA联合治疗对小鼠肝损伤中TGF-β/Smad信号传导通路相关的基因表达的抑制具有协同作用.