研究快报
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世界华人消化杂志. 2009-01-18; 17(2): 186-189
Published online 2009-01-18. doi: 10.11569/wcjd.v17.i2.186
靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体构建及体外抑制作用
黄秋林, 于永政, 阳勇, 吕忠诚
黄秋林, 于永政, 阳勇, 吕忠诚, 南华大学附属第一医院普通外科 湖南省衡阳市 421001
基金项目: 湖南省自然科学基金资助项目, No. 05JJ30041; 湖南省卫生厅科研基金资助项目, No. B2005101; 湖南省高等学校科学研究项目, No. 05C468.
作者贡献分布: 此课题由黄秋林设计; 研究过程由黄秋林, 于永政, 阳勇及吕忠诚操作完成; 数据分析由黄秋林与于永政完成; 本论文写作由黄秋林与于永政完成.
通讯作者: 黄秋林, 421001, 湖南省衡阳市, 南华大学附属第一医院普通外科. hql107@hotmail.com
电话: 0734-8279034
收稿日期: 2008-10-31
修回日期: 2008-11-30
接受日期: 2008-12-01
在线出版日期: 2009-01-18
Abstract

目的: 构建靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用.

方法: 设计合成靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA cDNA序列并与pSUPER载体连接, 构建VEGF siRNA表达载体, 经酶切鉴定和测序确认后, 脂质体2000介导VEGF siRNA转染HepG2细胞. RT-PCR及Western blot检测VEGF siRNA表达载体转染的HepG2细胞中VEGF基因表达.

结果: 通过双酶切鉴定和测序分析, 成功构建了靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体. RT-PCR和Western blot法检测转染VEGF siRNA表达载体的HepG2细胞VEGF mRNA及VEGF165表达下调, 其抑制率分别为65%和74%. 实验组中的HepG2中VEGF mRNA表达较阴性对照组、空载体组表达量显著下降(0.304±0.062 vs 0.896±0.061, 0.884±0.074, P<0.05).

结论: 成功构建了靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体, 且该载体在体外能有效抑制HepG2细胞VEGF基因表达.

Keywords: RNA干扰; 血管内皮细胞生长因子; 肝癌