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丹参酮ⅡA介导p38MAPK信号转导诱导人肝癌细胞凋亡
王炎, 李琦, 范忠泽, 孙珏, 高虹, 上海中医药大学附属普陀医院中医肿瘤科 上海市 200062
王忆勤, 上海中医药大学诊断教研室 上海市 201203
刘瑞海, Department of Food Science, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USA
王炎, 上海中医药大学, 医学硕士, 主要从事中医药治疗肿瘤的研究.
基金项目: 上海市中医药科研基金资助项目, No. 2004012A; 上海市重点学科资助项目, No. S30302.
作者贡献分布: 此课题由范忠泽与李琦设计; 研究过程由王炎操作完成; 研究所用新试剂及分析工具由范忠泽, 王忆勤, 孙珏及高虹提供; 数据分析由王炎完成; 本论文写作由王炎, 李琦及刘瑞海完成.
通讯作者: 李琦, 200062, 上海市普陀区兰溪路164号, 上海中医药大学附属普陀医院中医肿瘤科. lzwf@hotmail.com
电话: 021-62572723-4304 传真: 021-52665957
收稿日期: 2008-11-28
修回日期: 2008-12-17
接受日期: 2008-12-22
在线出版日期: 2009-01-18
修回日期: 2008-12-17
接受日期: 2008-12-22
在线出版日期: 2009-01-18
Abstract
目的: 研究丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的p38MAPK信号转导通路, 揭示其抗肝癌的部分机制.
方法: 4、8、16 mg/L丹参酮ⅡA分别作用人肝癌SMMC-7721细胞48 h后, 免疫荧光染色观察细胞凋亡情况; 琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带; 流式细胞仪法(Flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡和细胞周期; 荧光定量PCR检测Fas和Caspase-3基因mRNA的表达水平; 并比较阻断p38MAPK信号通路后丹参酮ⅡA对肝癌细胞凋亡和Fas和Caspase-3基因mRNA的表达.
结果: 丹参酮ⅡA作用48 h后, 荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞. 琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞DNA呈规律性的梯状条带. 4、8、16 mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞后的细胞凋亡率分别为12.83%±1.51%, 17.86%±2.70%和29.24%±7.58%, 与对照组6.30%±2.08%比较均有显著性差异(P<0.01); 阻断p38MAPK信号通路后, 凋亡率和G0/G1期细胞比例明显降低(P<0.01). 8 mg/L丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞48 h后Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显上升; 阻断p38MAPK信号通路后, 丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞的Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显下降.
结论: 丹参酮ⅡA能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡, 阻滞肝癌细胞于G0/G1期. 通过p38MAPK信号转导通路上调Fas、Caspase-3 mRNA的表达可能是其诱导肝癌细胞凋亡的重要机制.
Keywords: 丹参酮ⅡA; 肝癌; 凋亡; p38MAPK; 信号转导; Fas; Caspase-3