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世界华人消化杂志. 2009-07-08; 17(19): 1913-1918
Published online 2009-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i19.1913
Published online 2009-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v17.i19.1913
RNA干扰HIF-1α对血管生成拟态相关基因表达的影响
华杰, 施瑞华, 张红杰, 于莲珍, 朱宏, 肖斌, 张国新, 郝波, 南京医科大学第一附属医院消化内科 江苏省南京市 210029
华杰, 主治医师, 主要从事消化系肿瘤早期发病机制研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30770991.
作者贡献分布: 此课题由华杰、施瑞华及朱宏设计; 研究过程由华杰、郝波在张红杰、于莲珍、肖斌及张国新的指导下操作完成; 研究所用试剂及分析工具由施瑞华提供; 数据分析由华杰与郝波完成; 本论文写作由华杰与施瑞华完成.
通讯作者: 施瑞华, 教授, 210029, 江苏省南京市广州路300号, 南京医科大学第一附属医院消化内科. ruihuashi@126.com
收稿日期: 2009-04-09
修回日期: 2009-05-21
接受日期: 2009-06-08
在线出版日期: 2009-07-08
修回日期: 2009-05-21
接受日期: 2009-06-08
在线出版日期: 2009-07-08
Abstract
目的: 探讨常氧及缺氧培养条件下RNA干扰沉默人食管鳞癌细胞Eca-109缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对血管生成拟态相关基因表达的影响.
方法: 选择未转染处理的食管鳞癌Eca-109细胞和3株稳定转染HIF-1α SiRNA的Eca-109细胞, 分别予以常氧和缺氧培养, 缺氧培养12、24、36、48、60、72、96 h, 采用Western blot法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α蛋白及mRNA表达, 同时Western blot法检测上皮细胞激酶(EphA2)、血管上皮钙黏附素(VE-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、层粘连蛋白5γ2链(LN-5γ2)等血管生成拟态相关基因的表达.
结果: 缺氧条件下培养Eca-109细胞HIF-1α蛋白表达较常氧时增高, 以24-48 h为明显, 72-96 h开始减弱, 而HIF-1α mRNA检测差异无统计学意义(F = 0.70, P = 0.67); RNA干扰后细胞在常氧下HIF-1α、EphA2、LN-5γ2蛋白几乎无表达, 缺氧后亦无增强现象, VE-cadherin、MMP-2蛋白表达较未干扰细胞稍有减弱, 缺氧后表达稍增强, 但差异无显著性(均P>0.05).
结论: RNA干扰能抑制Eca-109细胞的HIF-1α基因表达, HIF-1α基因沉默后可以不同程度减少EphA2、LN-5γ2等血管生成拟态相关基因的表达.
Keywords: 血管生成拟态; RNA; 小分子干扰; 缺氧诱导因子1; 食管肿瘤; 细胞缺氧