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世界华人消化杂志. 2009-06-28; 17(18): 1809-1814
Published online 2009-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i18.1809
Published online 2009-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v17.i18.1809
胃癌耐药细胞株OCUM-2M/VP16的建立及其耐药机制
邱红, 熊慧华, 张明生, 陈元, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科 湖北省武汉市 430030
丁方勇, 武汉市急救中心 湖北省武汉市 430022
李瑞超, 华中科技大学同济医学院附属同济医院综合科 湖北省武汉市 430030
邱红, 硕士, 主治医师, 从事肿瘤放化疗的综合治疗, 研究方向为胃癌化疗耐药机制及逆转.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30801369; 日中医学协会笹川医学奖学金资助项目, No. 2007-2008[30].
作者贡献分布: 邱红与陈元对此研究贡献均等; 此实验由邱红与陈元设计及完成; 研究经费由张明生提供; 数据统计分析由丁方勇与李瑞超完成; 本论文写作由邱红与熊慧华完成.
通讯作者: 陈元, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科. chenyuan008@163.com
电话: 027-83663341
收稿日期: 2009-04-14
修回日期: 2009-05-22
接受日期: 2009-05-25
在线出版日期: 2009-06-28
修回日期: 2009-05-22
接受日期: 2009-05-25
在线出版日期: 2009-06-28
Abstract
目的: 建立耐VP16的胃癌耐药细胞株, 并初步探讨细胞发生VP16耐药的可能机制.
方法: 采用药物浓度梯度递增法诱导建立OCUM-2M/VP16耐药株. 细胞计数法绘制细胞生长曲线, 计算细胞倍增时间. MTT法检测细胞对6种化疗药物的IC50. 流式细胞仪分析细胞周期分布. 逆转录多聚酶链反应检测caspase-3, P53, DAPK-1, DAPK-2, DAPK-3, Bcl-2, ERCC-1, MDR-1及MRP基因mRNA的表达.
结果: OCUM-2M/VP16成功实现了对VP16的耐药, 耐药指数为40.53; 其增殖速率及细胞倍增时间明显低于OCUM-2M(细胞倍增时间: 22.96±0.96 h vs 30.29±2.55 h, P<0.01). OCUM-2M/VP16对Sn38、奥沙利铂及吉西他滨发生了交叉耐药, 但对5-FU及紫杉醇敏感性与亲代类似. OCUM-2M/VP16凋亡相关基因DAPK-2, DAPK-3和Bcl-2表达下调(OCUM-2M表达值为: 0.61、0.79及0.81, OCUM-2M/VP16为, 0.24、0.45、0.44, P<0.01), 耐药相关基因 ERCC-1和MDR-1表达上调(OCUM-2M为0.53及0.20, OCUM-2M/VP16则为0.84及0.41, P<0.01). caspase-3, P53, DAPK-1及MRP表达无变化.
结论: 成功构建胃癌耐药细胞株OCUM-2M/VP16, 该细胞株具有交叉耐药特性, 耐药机制涉及凋亡、耐药等多个基因表达变化.
Keywords: 鬼臼乙叉甙; 胃癌; 多药耐药; 凋亡