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结肠癌Lovo细胞RUNX3基因的表达与其增殖及凋亡的关系
倪志, 鲍缦夕, 杨彦, 邱艺坚, 王婷婷, 武警海南总队医院消化内科 海南省海口市 570203
刘南植, 赵秋, 覃华, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
倪志, 2003年华中科技大学同济医学院硕士, 主治医师, 主要从事消化系统疾病临床及基础研究．
作者贡献分布: 此课题由倪志, 刘南植, 赵秋及覃华共同设计; 研究过程由刘南植指导; 倪志, 鲍缦夕, 覃华及杨彦操作完成; 研究所用分析工具由刘南植, 赵秋提供; 数据分析由倪志, 邱艺坚和王婷婷完成; 本论文写作由倪志, 鲍缦夕和刘南植完成.
通讯作者: 倪志, 570203, 海南省海口市文明东路49号, 武警海南总队医院消化内科. hknizhi@163.com
电话: 0898-65343033
收稿日期: 2007-07-05
修回日期: 2008-02-19
接受日期: 2008-02-27
在线出版日期: 2008-03-08
修回日期: 2008-02-19
接受日期: 2008-02-27
在线出版日期: 2008-03-08
Abstract
目的: 探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响.
方法: 用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR 0.4, 4, 40 μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3 d, 继续常规培养5 d后, 采用四唑盐法(MTT)比色法观察细胞经药物处理前后的生长活性, 以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因RUNX3 mRNA的表达, 以甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR, MSP)检测细胞处理前后RUNX3的甲基化状态, 应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测.
结果: 与对照组相比, 0.4, 4, 40 μmol/L的5-Aza-CdR处理细胞后, 细胞RUNX3 mRNA的相对表达量(0.46±0.06, 0.71±0.06, 0.84±0.07 vs 0, P<0.01)和细胞凋亡率均增高(10.95%±2.09%, 17.61%±1.51%, 26.60%±1.89% vs 2.92%±0.93%, P<0.01), 呈剂量依赖性(F = 168.4, F = 145.7), 结肠癌Lovo细胞生长速率下降, RUNX3 mRNA重新表达, 其基因启动子区域部分甲基化.
结论: 5-Aza-CdR可逆转RUNX3启动子高甲基化状态, 抑制细胞生长, 诱导部分细胞凋亡.
Keywords: RUNX3基因; 甲基化; 5-氮-2'-脱氧胞苷; 四唑盐比色法; 流式细胞术; 聚合酶链反应