基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-12-28; 16(36): 4051-4055
Published online 2008-12-28. doi: 10.11569/wcjd.v16.i36.4051
小鼠骨髓基质干细胞的鉴定及体外诱导分化为肝细胞的可行性
刘焱, 李江利, 施晓雷, 方胜, 仇毓东
刘焱, 李江利, 施晓雷, 方胜, 仇毓东, 南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科 江苏省南京市 210008
刘焱, 2004年南京大学硕士, 主要从事肝脏移植及原发性肝癌的临床和基础研究工作.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30371391.
通讯作者: 仇毓东, 210008, 江苏省南京市, 南京大学医学院附属鼓楼医院肝胆外科. yudongqiu510@hotmail.com
电话: 025-83317016 传真: 025-83304616
收稿日期: 2006-10-30
修回日期: 2008-12-01
接受日期: 2008-12-08
在线出版日期: 2008-12-28
Abstract

目的: 分离、鉴定小鼠骨髓基质干细胞(MSCs)并探讨在体外多种细胞因子的诱导下分化为肝细胞的可行性.

方法: 获取小鼠骨髓干细胞, 进行体外贴壁培养、纯化, 观察不同传代次数细胞形态特点. 流式细胞法检测不同传代细胞的表面标志物CD45和CD90. 分离后的MSCs再经含有HGF, FGF-4, EGF三种细胞因子的诱导体系继续培养21 d, 分别以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测诱导后细胞的白蛋白(ALB)、细胞角化蛋白18(CK18)、以及甲胎蛋白(AFP)在基因和蛋白水平的表达.

结果: 培养的骨髓干细胞随传代次数增多细胞形态趋向为长梭形. 传代到第5代, 基质干细胞的表面标志CD90阳性细胞从原代的25.42%增加到93.47%, 造血干细胞的表面标志CD45表达阳性细胞从原代的86.49%降低到2.77%. 通过RT-PCR可检测出诱导第7天细胞表达AFP mRNA, ALB mRNA及CK18 mRNA; 通过Western blot可检测出诱导第21天的细胞表达ALB和CK18.

结论: 小鼠MSCs可以在体外被有效地分离纯化, 可以被诱导为表达肝细胞表面标志的肝细胞样细胞.

Keywords: 骨髓基质干细胞; 肝细胞; 诱导分化; 半定量逆转录聚合酶链反应