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世界华人消化杂志. 2008-10-08; 16(28): 3146-3151
Published online 2008-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i28.3146
Published online 2008-10-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i28.3146
大鼠Smad7真核表达质粒的构建及在肝星状细胞中的表达
杨小艳, 新疆石河子大学医学院第一附属医院老干一科 新疆维吾尔自治区石河子市 832008
杨勇, 新疆石河子大学医学院第一附属医院心内二科 新疆维吾尔自治区石河子市 832008
郑勇, 李睿, 孙侃, 常向云, 陈卫刚, 新疆石河子大学医学院第一附属医院消化内科 新疆维吾尔自治区石河子市 832008
周婷, 新疆石河子大学医学院第一附属医院中心实验室 新疆维吾尔自治区石河子市 832008
杨小艳, 医学硕士, 主要从事肝纤维化基因干预治疗的研究.
基金项目: 教育部科学技术研究重点资助项目, No. 207136; 兵团博士基金资助项目, No. 05JC08.
通讯作者: 郑勇, 832008, 新疆维吾尔自治区石河子市, 新疆石河子大学医学院第一附属医院消化内科. selia623@sina.com
电话: 0993-2859284
收稿日期: 2008-05-02
修回日期: 2008-09-20
接受日期: 2008-09-22
在线出版日期: 2008-10-08
修回日期: 2008-09-20
接受日期: 2008-09-22
在线出版日期: 2008-10-08
Abstract
目的: 构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒, 观察外源Smad7对肝星状细胞HSC-T6的转染, 并进一步研究其对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平的影响.
方法: 采用基因重组技术将Smad7 cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1(+), 构建大鼠Smad7真核表达质粒. 脂质体介导转染HSC-T6细胞, 分为正常对照组、空质粒组及转染组, G418筛选, 挑取阳性细胞, 运用Western blot检测Smad7蛋白表达情况, RT-PCR检测Smad7、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平.
结果: 酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功. Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较, Smad7 mRNA表达显著增加(1.053±0.009 vs 0.984±0.054, 0.986±0.044, P<0.01或0.05), 蛋白水平显著上调(0.083±0.026 vs 0.058±0.050, 0.056±0.064, 均P<0.05); Smad7转染组TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达降低(0.961±0.013 vs 1.039±0.013, 1.032±0.037; 0.592±0.096 vs 0.767±0.085, 0.770±0.090, 均P<0.01); Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义. 正常对照、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义.
结论: Smad7可能参与TGF-β/Smad信号转导, 在一定程度上具有抗纤维化的生物学活性.
Keywords: Smad7; 构建; 真核表达质粒; 肝星状细胞