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RNA干扰对肝素酶在肝癌细胞中表达及其肿瘤生长抑制的作用
檀英霞, 刘志玄, 李素波, 田曙光, 宫锋, 军事医学科学院野战输血研究所 北京市 100850
卞丽红, 军事医学科学院附属医院妇科 北京市 100071
檀英霞, 助理研究员, 主要从事血液生化研究.
基金项目: 军事医学科学院创新基金资助项目.
作者贡献分布: 宫锋、檀英霞和刘志玄对此文所作贡献均等; 此课题由宫锋、檀英霞、刘志玄、李素波、田曙光及卞丽红设计; 研究过程由檀英霞、刘志玄、李素波、田曙光及卞丽红操作完成; 数据分析由刘志玄、宫锋完成; 本论文写作由檀英霞及宫锋完成.
通讯作者: 宫锋, 100850, 北京市, 军事医学科学院野战输血研究所. gongfeng@nic.bmi.ac.cn
电话: 010-66931992 传真: 010-66931992
收稿日期: 2007-07-14
修回日期: 2007-12-04
接受日期: 2008-01-06
在线出版日期: 2008-01-18
修回日期: 2007-12-04
接受日期: 2008-01-06
在线出版日期: 2008-01-18
Abstract
目的: 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制肝癌细胞系HepG2肝素酶(Hpa)的表达, 体内观察其对肿瘤生长的抑制作用.
方法: 以脂质体介导的方法将构建的2个抗Hpa短发卡式RNA(Hpa-shRNA)真核表达载体稳定转染人肝癌细胞株HepG2(高表达Hpa), 并设空载体对照组; 流式细胞技术鉴定转染稳定性, Western blot及RT-PCR检测肝素酶蛋白和mRNA表达; 将干扰组和对照组的肿瘤细胞皮下接种裸鼠, 比较各组肿瘤的体质量和体积大小, 免疫组化法检测肝素酶在肿瘤组织的表达.
结果: 与空载体组相比, 干扰后的HepG2细胞中Hpa mRNA和蛋白表达明显降低, 干扰组裸鼠的肿瘤生长速度明显变慢, 统计结果表明干扰组在抑制肿瘤生长方面与空载体组、空白对照组存在显著差异(P<0.05), 两干扰组无显著差异(P>0.05).
结论: 应用RNAi技术沉默Hpa基因可以有效下调肝癌肿瘤细胞中Hpa mRNA及蛋白的表达, 抑制体内肿瘤生长.
Keywords: RNA干扰; 肝素酶; 肝癌; 免疫印迹; 免疫组化法