基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-07-08; 16(19): 2080-2085
Published online 2008-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i19.2080
HBx基因下调p21对HepG2细胞增殖与凋亡的影响
郭晓榕, 程斌, 郑要初, 林松挺, 黎培员
郭晓榕, 程斌, 郑要初, 林松挺, 黎培员, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科 湖北省武汉市 430030
郭晓榕, 2006年华中科技大学同济医学院硕士, 主要从事消化系统肿瘤研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30570821.
作者贡献分布: 郭晓榕与郑要初对此文所作贡献均等; 此课题由程斌设计; 研究过程由郭晓榕, 郑要初, 黎培员及林松挺完成; 研究所用新试剂及分析工具由程斌提供; 数据分析由郭晓榕与郑要初完成; 本论文写作由郭晓榕与程斌完成.
通讯作者: 程斌, 430030, 湖北省武汉市解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科. b.cheng@tjh.tjmu.edu.cn
电话: 027-83663612 传真: 027-83646605
收稿日期: 2008-04-02
修回日期: 2008-04-30
接受日期: 2008-05-05
在线出版日期: 2008-07-08
Abstract

目的: 构建转基因细胞模型HepG2/HBx, 观察HBx基因对HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响, 探讨细胞周期蛋白P21在其中的作用和意义.

方法: 应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx, RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达. 分别以四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测HepG2/HBx细胞及对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞(转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞)的增殖、周期和凋亡. 另半定量RT-PCR检测各组细胞中细胞周期蛋白P21与抑癌基因p53 mRNA的表达.

结果: HepG2/HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达. HepG2/HBx细胞生长速度加快. HepG2/HBx中G0/G1期细胞比例较对照组显著减少(43.34%±3.11% vs 57.69±4.28%, P<0.01), S期细胞比例明显增加(28.69%±1.17% vs 22.41%±1.99%, P<0.05), 同时还发现与对照组相比其凋亡率也显著降低(1.19%±0.06% vs 5.43%±0.42%, P<0.001). 细胞周期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx细胞中的表达较对照组细胞显著降低(0.16±0.05 vs 0.78±0.15, P<0.001), 而p53表达则无显著变化.

结论: HBx基因可下调细胞周期蛋白P21 mRNA的表达, 可能参与HBx基因加速HepG2细胞周期进程、促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用.

Keywords: HBx基因; p21; p53; HepG2细胞; 四唑蓝比色法; 流式细胞术; 免疫印迹; 逆转录-聚合酶链反应