基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-06-18; 16(17): 1859-1865
Published online 2008-06-18. doi: 10.11569/wcjd.v16.i17.1859
重组腺病毒Ad-PD-L1转染供体小鼠树突状细胞对受体小鼠淋巴细胞激活的影响
朱研, 李涛, 朱继业, 陈建飞, 冷希圣
朱研, 李涛, 朱继业, 陈建飞, 冷希圣, 北京大学人民医院肝胆外科 北京市 100044
朱研, 北京大学人民医院肝胆外科硕士, 主要从事肝移植免疫耐受的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471637.
作者贡献分布: 此课题由李涛, 朱继业及冷希圣设计; 研究过程由朱研及陈建飞操作完成; 本论文写作由朱研与李涛完成.
通讯作者: 朱继业, 100044, 北京市西城区西直门南大街11号, 北京大学人民医院肝胆外科. litao_pku@yahoo.com.cn
电话: 010-88324553 传真: 010-68318386
收稿日期: 2008-02-24
修回日期: 2008-04-16
接受日期: 2008-05-04
在线出版日期: 2008-06-18
Abstract

目的: 观察重组腺病毒载体Ad-PD-L1转染供体C57BL/6(H-2b)小鼠树突状细胞(DC)对受体DBA/2(H-2d)小鼠淋巴细胞增殖和激活的影响.

方法: 构建腺病毒穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV(-)-PD-L1和腺病毒骨架质粒pAdxsi-GFP-CMV-PD-L1, 对重组腺病毒Ad-PD-L1进行包装、扩增和纯化. 分离培养供体C57BL/6小鼠的DC, 分为3组: 腺病毒载体Ad-PD-L1转染组(A组), 空载体转染组(B组)和对照组(C组). Western blot检测转染后各组细胞PD-L1的表达. 分离受体DBA/2小鼠的淋巴细胞, 用羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记, 将供体C57BL/6小鼠的DC和受体DBA/2小鼠淋巴细胞混合培养, 流式细胞仪观察淋巴细胞的增殖情况.

结果: 酶切及测序证实含PD-L1的重组腺病毒载体Ad-PD-L1构建成功. 转染供体C57BL/6小鼠的DC后其PD-L1的表达升高37%(P<0.05), 将转染了PD-L1的DC与受体DBA/2小鼠的淋巴细胞进行共培养. 与对照组相比, PD-L1表达升高后, 明显地抑制了淋巴细胞的增殖和活化. 受体DBA/2小鼠的淋巴细胞增殖降低41%(P<0.01).

结论: 转染供体C57BL/6小鼠DC后通过共刺激通路PD-1/PD-L1抑制了受体DBA/2小鼠淋巴细胞的增殖和激活.

Keywords: PD-L1; PD-1; 共刺激通路; 腺病毒载体; 树突状细胞; 淋巴细胞激活