基础研究
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世界华人消化杂志. 2008-01-08; 16(1): 39-44
Published online 2008-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v16.i1.39
RNA干扰供体大鼠库普弗细胞B7分子表达对受体大鼠淋巴细胞激活的影响
李涛, 朱继业, 柳枫, 冷希圣
李涛, 朱继业, 柳枫, 冷希圣, 北京大学人民医院肝胆外科 北京市 100044
李涛, 2003年北京大学医学部普通外科博士, 主治医师, 主要从事肝硬化门静脉高压症发病机制和肝移植免疫耐受的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471637.
通讯作者: 朱继业, 100044, 北京市西城区西直门南大街11号, 北京大学人民医院肝胆外科. litao_pku@yahoo.com.cn
电话: 010-88324553 传真: 010-68318386
收稿日期: 2007-09-09
修回日期: 2007-12-22
接受日期: 2007-12-25
在线出版日期: 2008-01-08
Abstract

目的: 观察RNA干扰供体Lewis大鼠库普弗细胞(KC)B7分子表达对受体BN大鼠淋巴细胞增殖和生成IL-2的影响. 

方法: 分离培养供体Lewis大鼠KC, 设计大鼠B7分子的干扰片段, 构建并鉴定含B7干扰片段的RNA干扰载体Psilencer 3.1H1-Neo-B7, 将RNA干扰载体转染供体大鼠的KC, 转染后采用RT-PCR方法检测KC上B7分子表达的变化. 将转染后的KC分为3组, 对照组(A); 空载体组(B); RNA干扰B7表达组(C). 分离培养受体BN大鼠的淋巴细胞, 将以上各组细胞分别与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 采用MTT法检测各组淋巴细胞的增殖情况. 采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-2的含量. 

结果: 分离培养的供体Lewis大鼠KC得率为5×107, 活率大于98%. 构建的RNA干扰载体经酶切和测序鉴定正确. RNA干扰KC后其B7的表达降低了22%(P<0.01). 将干扰B7表达的KC与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 与对照组相比, 受体BN大鼠的淋巴细胞增殖降低了49%(P<0.01), 细胞培养上清中IL-2的分泌量下降了67%(P<0.01).

结论: RNA干扰供体Lewis大鼠KC B7分子的表达可明显抑制受体BN大鼠淋巴细胞的增殖和IL-2的产生.

Keywords: 库普弗细胞; B7; 共刺激通路; RNA干扰; 免疫耐受