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JNK/SAPK信号转导系统在三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡中的作用
李航宇, 刘金钢, 中国医科大学附属第二医院普外科 辽宁省沈阳市 110004
钟鑫平, 第二军医大学附属东方肝胆医院胆道二科 上海市 200433
隋春阳, 孔凡民, 董明, 张浩, 中国医科大学附属第一医院普外科 辽宁省沈阳市 110001
李航宇, 医学博士, 讲师, 主治医师, 主要从事肝胆恶性疾病的基础与临床研究.
基金项目: 国家自然基金资助项目, No. 30572114.
通讯作者: 李航宇, 110004, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学附属第二医院普外科. li_hangyu@126.com
电话: 024-83955279
收稿日期: 2006-12-20
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-03-08
修回日期: 2007-01-01
接受日期: 2007-01-10
在线出版日期: 2007-03-08
Abstract
目的: 探讨JNK/SAPK信号转导系统在三氧化二砷(As2O3)诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡过程中的作用.
方法: 采用MTT法观察不同浓度的As2O3对人类肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用; 以流式细胞术观察细胞的凋亡率及生长周期的变化; 以Western blot法检测p-MEK4、JNK、p-JNK、Caspase-3及PARP蛋白在As2O3作用下及SP600125阻断JNK信号转导通路情况下的表达.
结果: 各浓度As2O3均能明显抑制肝癌细胞HepG2增殖, 且具有剂量依赖性和时间依赖性; 流式细胞术(FCM)分析显示, As2O3能够诱导肝癌细胞HepG2凋亡且具有时间依赖性, 细胞滞留于G2/M期(0, 24, 48, 72 h百分率分别为7.22%±1.50%, 11.56%±0.73%, 33.8%±1.62%, 46.02%±0.11%); Western blotting结果显示, As2O3诱导肝癌细胞HepG2凋亡伴随着Caspase-3和PARP的活化; As2O3作用于HepG2细胞10 min后p-MEK4和p-JNK蛋白表达开始增加, 20 min达到高峰, 30 min开始减少, 总JNK蛋白的含量无明显改变, MEK4和JNK的激活早于细胞凋亡; 用SP600125预处理HepG2细胞株后, 可以明显减少Caspase-3和PARP的活化.
结论: As2O3可以体外通过诱导细胞凋亡抑制肝癌细胞株HepG2的增殖, 细胞凋亡通过Caspase-3途径实现. JNK信号转导通路参与了As2O3诱导的HepG2凋亡反应, 并位于Caspase-3的上游.
Keywords: 三氧化二砷; 肝癌; MTT法; 流式细胞术; Western blot法