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抑制Akt活化对人结肠癌细胞c-FLIP基因表达的作用
周晓东, 吕农华, 朱萱, 徐萍, 陈幼祥, 南昌大学第一附属医院消化内科 江西省南昌市 330006
陈红霞, 南昌大学第一附属医院妇产科 江西省南昌市 330006
于红刚, 于皆平, 武汉大学人民医院消化内科 湖北省武汉市 430060
通讯作者: 周晓东, 330006, 江西省南昌市, 南昌大学第一附属医院消化内科. zhouxd7612@hotmail.com
电话: 0791-8694905
收稿日期: 2006-11-09
修回日期: 2006-11-01
接受日期: 2006-11-28
在线出版日期: 2007-02-18
修回日期: 2006-11-01
接受日期: 2006-11-28
在线出版日期: 2007-02-18
Abstract
目的: 探讨结肠癌细胞中抑制蛋白激酶B(PKB/Akt)的活化对c-FLIP基因表达的调控作用.
方法: 取对数生长期的HT-29细胞系, 分别采用10、20和40 nmol/L的Akt活化特异性抑制剂wortmannin对其进行干预, 运用MTT法检测不同干预时间点的细胞增殖抑制情况. 采用40 nmol/L的wortmannin干预HT-29细胞0, 3, 6, 12, 24 h后, 采用Western blot检测磷酸化Akt和c-FLIP蛋白表达水平, 逆转录PCR检测c-FLIP基因的转录水平.
结果: 三个浓度的wortmannin都对HT-29细胞的生长具有抑制作用, 随着浓度、时间的递增, 其抑制效应逐渐增强(P<0.01或0.05), 而对照组未见明显变化(P>0.05). 随着wortmannin的干预时间延长, 磷酸化Akt蛋白的表达水平明显降低, 同时c-FLIP蛋白的表达水平也随之下降, 24 h后二者表达水平分别下降了82%和91%. wortmannin干预HT-29细胞3 h后, 与对照组相比其c-FLIP mRNA表达水平已明显下降到40%, 24 h后其表达水平下降到25%.
结论: Akt活化的特异性抑制剂wortmannin可抑制体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长, 结肠癌中可能存在Akt/c-FLIP信号通路调节c-FLIP基因的表达.
Keywords: 大肠癌; FLICE抑制蛋白; 蛋白激酶B