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世界华人消化杂志. 2007-12-08; 15(34): 3625-3628
Published online 2007-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i34.3625
Published online 2007-12-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i34.3625
人肠三叶因子酵母双杂交载体的构建及其自激活作用鉴定
卢雅丕, 董菁, 周飞, 王琳, 陈美娅, 廉亚美, 张波, 任建林, 厦门大学附属中山医院消化内科 厦门大学消化疾病研究所 厦门市消化疾病中心 福建省厦门市 361004
基金项目: 福建省自然科学基金资助项目, No. 2006J0380; 福建省卫生厅青年科研基金资助, No. 2004-2-6和No. 2006-1-53.
通讯作者: 任建林, 361004, 福建省厦门市, 厦门大学附属中山医院消化内科. jianlin.ren@xmzsh.com
电话: 0592-2993170 传真: 0592-2993170
收稿日期: 2007-09-09
修回日期: 2007-11-02
接受日期: 2007-11-28
在线出版日期: 2007-12-08
修回日期: 2007-11-02
接受日期: 2007-11-28
在线出版日期: 2007-12-08
Abstract
目的: 构建人肠三叶因子(hITF/hTFF3)酵母双杂交诱饵载体并鉴定其自激活作用.
方法: 从人结肠黏膜提取总RNA. RT-PCR制备总cDNA, PCR扩增hTFF3基因, TA克隆至pGEMT载体并测序鉴定. 经NcoⅠ/XhoⅠ双酶切, 连接到pENTR11质粒构建入门克隆. LR反应获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-hTFF3, 测序正确后与酵母双杂交空猎物载体pDEST22共同转化Mav203酵母细胞, SD/-Leu/-Trp固体培养基上生长. 挑取单克隆划线接种到分别含有不同浓度氨基三唑(3AT)的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上, 观察重组诱饵载体的自激活情况.
结果: 从人正常结肠黏膜成功克隆了hTFF3基因, 构建了pDEST32- hTFF3酵母表达质粒. 转化pDEST32- hTFF3和pDEST22的Mav203酵母细胞可在3AT浓度为30 mmol/L以下的SD/-Leu/-Trp/-His培养基上生长, 在3AT浓度为30 mmol/L以上的培养基上则未见酵母细胞生长.
结论: 所构建的pDEST32-hTFF3可作为酵母双杂交的诱饵质粒.
Keywords: 肠三叶因子; 酵母双杂交载体; 自激活作用