基础研究
Copyright ©The Author(s) 2007. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2007-11-28; 15(33): 3474-3478
Published online 2007-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i33.3474
hAFP增强子调控的肝癌特异性基因治疗载体的构建及活性测定
马晓娟, 匡安仁, 黄蕤
马晓娟, 匡安仁, 黄蕤, 四川大学华西医院核医学科 四川省成都市 610041
马晓娟, 1997年东南大学医学院本科, 主治医师, 主要从事分子核医学研究工作.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30670585.
通讯作者: 匡安仁, 610041, 四川省成都市外南国学巷37号, 四川大学华西医院核医学科. kuanganren＠263.net
电话: 028-85422696 传真: 028-85422696
收稿日期: 2007-08-16
修回日期: 2007-11-02
接受日期: 2007-11-28
在线出版日期: 2007-11-28
Abstract

目的: 构建新型AFP顺式作用元件调控的基因表达载体, 检测该调控元件的特异性和活性表达.

方法: 设计含有特定酶切位点的引物, 采用PCR法从HepG2细胞中克隆AFP启动子及增强子基因亚区片段. 启动子与增强子长、短片段分别与含有报告基因荧光素酶基因的载体pGL-3的多克隆位点连接, 构建不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc. 经测序, PCR及酶切鉴定各重组体. 用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系进行荧光强度及特异性表达测定.

结果: 成功地将AFP基因启动子、增强子克隆到报告基因载体pGL-3的多克隆位点, 构建成为不同长度hAFP增强子调控的肝癌特异性Luciferase表达载体APSE-Luc/APLE-Luc, 酶切鉴定和DNA序列分析无误. 转染APLE-Luc质粒的细胞中Luciferase表达量明显高于转染APSE-Luc质粒的细胞, 其在HepG2细胞中的表达明显高于SMMC7721细胞及Hela细胞.

结论: 成功构建AFP启动子与增强子联合调控载体APSE-Luc/APLE-Luc. AFP增强子能够特异性地增强目的基因在AFP阳性细胞中表达, 并且不同的亚区活性不同, 长片段的活性明显高于短片段.

Keywords: 甲胎蛋白; 启动子; 增强子; 克隆; 聚合酶链式反应; 载体; 肝癌