基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-11-08; 15(31): 3284-3288
Published online 2007-11-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i31.3284
HER-2基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建及序列分析
韩明阳, 吴爱国, 郭爱林, 李鹏, 纪术峰, 刘铮
韩明阳, 吴爱国, 李鹏, 纪术峰, 南方医科大学珠江医院普通外科 广东省广州市 510280
郭爱林, 广东省人民医院医学研究中心 广东省广州市 510080
刘铮, 南方医科大学病理生理实验室 广东省广州市 510515
韩明阳, 南方医科大学珠江医院普通外科硕士生, 主要从事大肠癌的RNA干扰研究.
基金项目: 广东省科技计划项目, No. 2005B31201011.
通讯作者: 吴爱国, 510280, 广东省广州市工业大道中253号, 南方医科大学珠江医院普通外科. yang07641@126.com
收稿日期: 2007-06-15
修回日期: 2007-09-13
接受日期: 2007-09-28
在线出版日期: 2007-11-08
Abstract

目的: 利用RNA干扰(RNAi)技术, 以HER-2为靶基因, 设计构建重组表达载体, 并进行测序鉴定.

方法: 设计具有短发夹结构的两条DNA序列, 经退火成互补双链, 再克隆至载体pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体, 转化DH5α菌株, 提取质粒行酶切鉴定后, 并进行序列测定. 再转染人大肠癌HT29细胞, 进行荧光摄像和G418抗性筛选.

结果: 将合成的DNA序列退火后克隆到载体上, 经酶切和测序鉴定确实为所需序列.

结论: HER-2靶向RNA干扰重组表达载体的构建成功, 并可以进行稳定筛选.

Keywords: HER-2基因; RNA干扰; 重组表达载体; 短发夹RNA