研究快报
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世界华人消化杂志. 2007-09-28; 15(27): 2934-2937
Published online 2007-09-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i27.2934
布鲁氏菌自杀载体的改建及其在突变株构建中的应用
王玉飞, 陈泽良, 乔凤, 汪舟佳, 杜昕颖, 苑锡铜, 黄留玉
王玉飞, 陈泽良, 乔凤, 汪舟佳, 杜昕颖, 苑锡铜, 黄留玉, 军事医学科学院疾病预防控制所 北京市 100071
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30600024.
通讯作者: 黄留玉, 100071, 北京市丰台区小屯路109号, 疾病预防控制所传染病控制中心. huangliuyuly@163.com
电话: 010-66933356
收稿日期: 2007-05-08
修回日期: 2007-09-13
接受日期: 2007-09-28
在线出版日期: 2007-09-28
Abstract

目的: 改建布鲁氏菌自杀载体.

方法: 用NdeⅠ将pKOBEG-SacB质粒中的反向筛选基因sacB切下来, 与同样酶切处理的pUC19质粒连接, 得到pUC19-SacB, 经测序和蔗糖筛选实验证实.

结果: 成功将SacB从pKOBEG-SacB中切下来并插入到pUC19质粒中, 构建得到了pUC19-SacB. 测序和蔗糖筛选实验证实, 插入的sacB基因具有较好的反筛功能. 我们利用该质粒, 成功的构建了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的突变株, 改建的载体能高效的应用于布鲁氏菌染色体的精确修饰.

结论: 构建了一个新的自杀质粒pUC19-SacB, 该质粒能用于布鲁氏菌无痕缺失突变株的构建.

Keywords: 布鲁氏菌; 反向筛选; 自杀载体