基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-07-28; 15(21): 2295-2299
Published online 2007-07-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i21.2295
NO体外对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响
刘冬妍, 崔巍
刘冬妍, 中国医科大学附属盛京医院检验科 辽宁省沈阳市 110004
崔巍, 中国医科大学附属第一医院消化内科 辽宁省沈阳市 110001
刘冬妍, 副教授, 博士, 主要从事感染免疫和肠道免疫.
通讯作者: 刘冬妍, 110004, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学附属盛京医院检验科. dongyan.liu@yahoo.com.cn
电话: 024-81805756
收稿日期: 2007-04-07
修回日期: 2007-07-20
接受日期: 2007-07-28
在线出版日期: 2007-07-28
Abstract

目的: 探讨一氧化氮(NO)对肠上皮细胞表达紧密连接蛋白Occludin的影响, 以研究NO对肠黏膜屏障的作用机制.

方法: 将NO的供体Sin1与肠上皮细胞株Caco-2共培养24 h, 采用MTT方法观察NO对肠上皮细胞的作用, 并分别提取细胞蛋白和总RNA, 采用免疫蛋白印迹(Western blot)蛋白半定量方法和实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)方法检测不同NO浓度对Caco-2细胞表达紧密连接蛋白Occludin蛋白和mRNA表达的影响.

结果: 随着Sin1浓度升高(125, 250, 500和1000 μmol/L)NO对细胞的杀伤作用产生并逐渐增大, Occludin蛋白表达量和mRNA的相对表达量与无Sin1刺激时蛋白及mRNA的表达量相比明显降低(蛋白: 375±0.5, 374±0.8, 363±0.3, 363±0.7 vs 398±0.7; mRNA: 0.689±0.01, 0.578±0.09, 0.554±0.03, 0.619±0.04 vs 1, 均P<0.01).

结论: NO可直接损伤肠上皮细胞, 同时以剂量依赖形式在蛋白和分子水平影响紧密连接蛋白Occludin的表达.

Keywords: 一氧化氮; Sin1; Caco-2细胞; 紧密连接蛋白Occludin; 免疫印迹; 实时定量聚合酶链式反应