基础研究
Copyright ©The Author(s) 2007. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2007-07-08; 15(19): 2101-2107
Published online 2007-07-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i19.2101
siRNA沉默STAT3基因对人肝癌细胞的抑制及对相关生长调控基因的调节
李静, 朴云峰, 蒋政, 丁百静
李静, 朴云峰, 丁百静, 吉林大学第一医院消化科 吉林省长春市 130021
蒋政, 锦州市第二医院骨科 辽宁省锦州市 121003
李静, 辽宁医学院附属第一医院消化科副教授, 硕士研究生导师, 主要从事消化系肿瘤的基因诊断与基因治疗的研究.
通讯作者: 李静, 130021, 吉林省长春市, 吉林大学第一医院消化科. jz7203@yahoo.com.cn
电话: 0431-84995918
收稿日期: 2007-03-31
修回日期: 2007-04-11
接受日期: 2007-04-21
在线出版日期: 2007-07-08
Abstract

目的: 探讨RNA干扰技术沉默STAT3基因表达对人肝癌细胞的抑制作用及对相关生长调控基因的调节.

方法: 构建pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒, 转染人肝癌细胞株SMMC 7721, 采用MTT法观察重组质粒对肝癌细胞的生长抑制, RT-PCR和Western blot及免疫组化法分别观察STAT3基因和蛋白水平的变化, 同时检测 survivin, c-myc, VEGF, p53, caspase3生长调控基因的mRNA, 并用流式细胞技术(FCM)及AO/EB染色方法观察细胞凋亡.

结果: pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒对肝癌细胞的生长有抑制作用, 实验组48 h和72 h抑制率分别为59.32%, 76.49%, 与空白组及阴性组细胞相比有显著性差异(P<0.01); 在重组质粒组, STAT3基因mRNA及蛋白水平表达降低, surviving, VEGF的mRNA表达下调, p53, caspase3的mRNA表达上调(P<0.01), c-myc的mRNA表达却无明显改变; 重组质粒可诱导SMMC 7721细胞凋亡, 凋亡率达21.6%(P<0.01), 细胞周期分析显示细胞阻滞于G2期.

结论: pSilencer 3.0-H1-STAT3-siRNA可能通过下调基因survivin和VEGF mRNA表达, 上调p53和caspase3 mRNA表达来抑制STAT3基因在人肝癌细胞中的表达.

Keywords: STAT3基因; 肝癌; RNA干涉; pSilencer 3.0-H1-siRNA-STAT3重组质粒; 细胞凋亡