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世界华人消化杂志. 2007-05-08; 15(13): 1549-1553
Published online 2007-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i13.1549
Published online 2007-05-08. doi: 10.11569/wcjd.v15.i13.1549
VEGF-C基因靶向RNA干扰重组表达载体的构建和表达
周慧聪, 李继昌, 郑州大学第一附属医院消化内科 河南省郑州市 450052
亢春彦, 河南省职工医学院病理教研室 河南省郑州市 450052
张艳, 郑州大学基础医学院药理教研室 河南省郑州市 450052
通讯作者: 周慧聪, 450052, 河南省郑州市, 郑州大学第一附属医院消化内科. hczhouar@163.com
电话: 0371-66862182
收稿日期: 2006-11-28
修回日期: 2007-01-04
接受日期: 2007-01-27
在线出版日期: 2007-05-08
修回日期: 2007-01-04
接受日期: 2007-01-27
在线出版日期: 2007-05-08
Abstract
目的: 利用质粒pSilencer3.1-H1构建针对人血管内皮生长因子-C(VEGF-C)基因的表达载体, 测序鉴定并观察在胃癌细胞中的表达.
方法: 根据质粒pSilencer3.1-H1要求设计两对小干扰RNA靶序列, 退火形成互补的双链, 通过与线性化的pSilencer3.0-H1相应位点连接、转化大肠杆菌, 扩增、纯化得到所需质粒, 酶切电泳及测序鉴定后转染胃癌细胞株SGC-7901, Western blot检测转染前后VEGF-C基因的蛋白表达.
结果: 经酶切和测序鉴定, 针对VEGF-C基因的siRNA表达载体构建成功. 转染胃癌细胞株SGC-7901后, Western blot检测显示VEGF-C基因蛋白表达明显降低, pSilencer3.1-VEGF-C1组抑制效果明显, 其抑制率为81.2%, 与阴性对照组相比差异具有显著性(P<0.05).
结论: 成功构建了针对人VEGF-C基因的siRNA表达载体和稳定转染的胃癌细胞株SGC-7901.
Keywords: 胃癌; 血管内皮生长因子-C; 重组质粒; RNA干扰