基础研究
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世界华人消化杂志. 2007-04-28; 15(12): 1370-1375
Published online 2007-04-28. doi: 10.11569/wcjd.v15.i12.1370
持续释放人血管抑素的基因修饰化工程细胞hE/293细胞株的建立
赵卉, 潘静坤, 罗芸, 田磊, 薛毅珑
赵卉, 潘静坤, 罗芸, 田磊, 薛毅珑, 中国人民解放军总医院老研所细胞室 北京市 100853
赵卉, 2004年石河子大学医学院硕士, 2005年至今中国人民解放军总医院博士在读, 主要从事生物型人工器官在临床的应用方面的研究.
通讯作者: 薛毅珑, 100853, 北京海淀区复兴路28号, 中国人民解放军总医院老研所细胞室. xueyl@plagh.com
电话: 010-66937914
收稿日期: 2007-02-09
修回日期: 2007-02-20
接受日期: 2007-03-17
在线出版日期: 2007-04-28
Abstract

目的: 在人胚肾HEK293细胞中转染真核表达载体pSNA2/hEndostatin (hEndostatin, 人血管抑素), 建立能稳定分泌hES的基因工程细胞株.

方法: 将含有IL-2分泌肽的人endostatin(ES)全长cDNA插入真核表达载体pSNA2, 产生重组质粒pSNA2/hEndostatin; 利用阳离子脂质体介导将其转染入HEK293细胞中; 用G418筛选出阳性克隆细胞, 将其命名为hE/293细胞. 用Western blot法检测hE/293细胞培养上清中分泌的hES蛋白. 血管内皮细胞(ECV304)增殖抑制试验及鸡胚尿囊膜试验观察其分泌的hES蛋白的抗增殖活性.

结果: 经过双酶切和DNA测序证实构建出了含hES基因的真核表达载体. 通过G418抗性筛选筛选出稳定表达hES的细胞株3株, 将其命名为hE/293细胞; Western blot检测该细胞株培养上清中存在分子量为20 kDa的ES蛋白; ECV304增殖抑制试验显示, 与HEK293细胞组相比,hE/293细胞组分泌的ES蛋白对bFGF刺激的血管内皮细胞增殖有明显的抑制作用(48 h: 0.125±0.007 vs 0.159±0.020, P<0.01; 72 h: 0.088±0.016 vs 0.249±0.070, P<0.01); 鸡胚尿囊膜试验证实hE/293细胞分泌的ES蛋白可以抑制鸡胚尿囊膜血管生长.

结论: 所构建的hE/293细胞株可以稳定的分泌hES蛋白, 并能抑制ECV304细胞生长及鸡胚尿囊膜血管生长.

Keywords: 人内皮抑素; 真核表达载体; 人胚胎肾细胞; hES细胞株; Western blot