研究快报
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世界华人消化杂志. 2006-02-28; 14(6): 626-629
Published online 2006-02-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i6.626
小鼠甲胎蛋白基因的克隆表达鉴定及稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株的建立
田耕, 易继林, 刘积良, 翁准
田耕, 刘积良, 翁准, 深圳市第二人民医院肿瘤科 广东省深圳市 518035
易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 湖北省武汉市 430030
通讯作者: 田耕, 518035, 广东省深圳市福田区笋岗西路3002号, 深圳市第二人民医院肿瘤科. tiangeng666@yahoo.com.cn
电话: 0755-83366388-2118
收稿日期: 2005-10-14
修回日期: 2006-01-09
接受日期: 2006-01-11
在线出版日期: 2006-02-28
Abstract

目的: 克隆小鼠甲胎蛋白(AFP)基因并进行表达鉴定, 构建小鼠AFP真核表达载体并建立稳定表达甲胎蛋白的小鼠肿瘤细胞株.

方法: 从Hepa1-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR, 克隆出小鼠AFP基因, 亚克隆于pcDNA3.1中构建真核表达载体pmAFP, 进行酶切、测序和表达鉴定, pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞株, RT-PCR检测EL-4(mAFP)细胞mAFP mRNA的表达, Western blot检测mAFP蛋白表达, 将EL-4(mAFP)细胞种植于6只小鼠背部皮下观察成瘤情况.

结果: RT-PCR成功克隆出小鼠AFP基因, 酶切、测序和表达鉴定证实真核表达载体pmAFP构建成功, RT-PCR及Western blot检测证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA及蛋白的表达, 5只小鼠背部皮下种植处有肿瘤形成, 22 d肿瘤体积为2 279.97±235.13 mm3.

结论: 小鼠mAFP基因克隆成功, 真核表达载体构建成功, 建立的EL-4(mAFP)细胞株能有效表达小鼠甲胎蛋白, 在小鼠体内成瘤性良好.

Keywords: 甲胎蛋白; 小鼠; 真核表达载体; 细胞株