Copyright
©The Author(s) 2006. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
利用大鼠Y染色体特异性PCR技术检测卵圆细胞源性肝癌细胞
陈铁军, 方驰华, 朱明德, 南方医科大学珠江医院肝胆外科 广东省广州市 510282
陈铁军, 男, 1979-03-05生, 辽宁省鞍山市人, 汉族, 2003年南方医科大学硕士生, 主要从事肝胆胰外科疾病的研究.
基金项目: 广东省自然科学基金资助项目 , No. 2002.020097 .
通讯作者: 方驰华, 510282, 广东省广州市, 南方医科大学珠江医院普外科. fch58520@sina.com
电话: 020-35509612
收稿日期: 2005-11-23
修回日期: 2005-11-29
接受日期: 2005-12-02
在线出版日期: 2006-02-28
修回日期: 2005-11-29
接受日期: 2005-12-02
在线出版日期: 2006-02-28
Abstract
目的: 利用Y染色体体细胞的特异性来寻找卵圆细胞分化为肝癌细胞的直接证据, 从而为卵圆细胞源性的研究及临床肝癌治疗方法提供理论依据.
方法: 选择健康♂Wistar大鼠30只饲喂每千克含0.6 g 3-甲基-4-二甲基偶氮苯(DAB)的饲料4 wk, 建立卵圆细胞增生的♂Wistar大鼠动物模型. 卵圆细胞的分离、提取和鉴定(光镜、电镜、免疫组化). 将实验用♀Wistar大鼠60只随机平分成对照组和实验组. 对照组不接种细胞悬液, 连续喂含DAB饲料14 wk. 实验组按25 mg/kg体重戊巴比妥腹腔麻醉, 消毒开腹, 用吸取♂Wistar大鼠卵圆细胞悬液, 接种至肝脏包膜下, 每点106个, 之后连续喂含DAB饲料14 wk, 促进肝肿瘤的生成. 从GenBank调出雄性大鼠的SRY基因, 利用引物设计软件设计引物片断. 14 wk后提取两组大鼠肝肿瘤组织的基因组DNA, 利用所设计的引物进行PCR扩增, 对PCR产物进行电泳分析.
结果: 光镜下可找到卵圆细胞, 核仁小而清晰, 胞质少, 细胞体积较小, 约为正常肝细胞的1/3, 直径约9-12 μm不等. 电镜下观察可见细胞表面少量短而小的微绒毛突起, 呈现未分化细胞的形态. 免疫组化观察肝卵圆细胞胞质c-kit染色呈棕黄色阳性信号. 14 wk后对照组和实验组共计60只大鼠均见肝脏肿瘤生成, 肿瘤组织在外观上和性状上无显著性差异. 实验组电泳后见与设计片断长度相符的电泳阳性条带.
结论: 大鼠的卵圆细胞可以分化为肝癌细胞, 为卵圆细胞源性肝癌细胞的假说提供实验依据.
Keywords: 干细胞；肝卵圆细胞；肝干细胞；免疫组织化学