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世界华人消化杂志. 2006-11-28; 14(33): 3190-3194
Published online 2006-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i33.3190
Published online 2006-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i33.3190
cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变菌株的构建及鉴定
黄志刚, 段广才, 黄学勇, 郑州大学公共卫生学院流行病学教研室 河南省郑州市 450052
段广才, 范清堂, 郑州大学河南省分子医学重点实验室 河南省郑州市 450052
黄志刚, 河北工程大学医学院教师, 副教授, 郑州大学公共卫生学院在读博士研究生, 主要从事幽门螺杆菌分子流行病学研究.
通讯作者: 段广才, 450052, 河南省郑州市大学路40号, 郑州大学河南省分子医学重点实验室. gcduan@public.zz.ha.cn
电话: 0371-66912869
收稿日期: 2006-07-29
修回日期: 2006-08-08
接受日期: 2006-08-14
在线出版日期: 2006-11-28
修回日期: 2006-08-08
接受日期: 2006-08-14
在线出版日期: 2006-11-28
Abstract
目的: 构建cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株.
方法: 运用基因同源重组方法将卡那霉素抗性基因(kmR)连接到PCR扩增cagA基因两端区域产生的2个基因片段之间, 并共同插人到pBluescript SKⅡ(-)载体的多克隆位点中, 构建出带卡那霉素抗性标志的缺失突变载体pBs-cagA-mutant. 将突变载体转化到含完整cagA基因的突变受体MEL-H. pylori 27菌株中. 卡那霉素筛选出cagA基因缺失的中国幽门螺杆菌突变株, 并经PCR和DNA测序鉴定.
结果: 构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示, 产生的条带与设计结果完全一致. PCR方法扩增突变株cagA, kmR基因显示, cagA基因已被完整敲除掉, DNA测序证实筛选得到了cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株. 连续培养25代后证实, 幽门螺杆菌突变株具有良好稳定性.
结论: 首次成功构建出1株中国人来源的、cagA基因缺失的幽门螺杆菌突变株.
Keywords: 幽门螺杆菌; cagA基因; 缺失表达; 突变体