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世界华人消化杂志. 2006-11-28; 14(33): 3184-3189
Published online 2006-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i33.3184
Published online 2006-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v14.i33.3184
短发夹状RNA对人肝癌细胞环氧合酶-2的抑制作用
王华枫, 徐可树, 钱伟, 汪步海, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科 湖北省武汉市 430022
王华枫, 2006年华中科技大学同济医学院附属协和医院硕士, 主要从事肝癌的基础研究.
通讯作者: 徐可树, 430022, 湖北省武汉市, 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科. xuzou@medmail.com.cn
电话: 027-67119890
收稿日期: 2006-07-03
修回日期: 2006-07-18
接受日期: 2006-08-10
在线出版日期: 2006-11-28
修回日期: 2006-07-18
接受日期: 2006-08-10
在线出版日期: 2006-11-28
Abstract
目的: 构建针对人环氧合酶-2(COX-2)基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒, 观察其在不同时间点对人不同肝癌细胞株COX-2表达的影响.
方法: 以人COX-2 mRNA编码区作为RNA干扰靶点, 构建shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2, 应用阳离子脂质体分别转染人肝癌细胞株HepG2和Bel7402, 利用逆转录聚合酶链反应和Western blot法分别观察两株细胞转染后24, 48, 72,和96 h COX-2 mRNA和蛋白的表达变化, 检测抑制效果.
结果: 质粒在HepG2细胞和Bel7402细胞中的转染率分别约为60%和54%. WBH1导入细胞24, 48, 72和96 h后, 逆转录聚合酶链反应检测COX-2 mRNA表达抑制率, HepG2细胞分别为18.5%, 88.6%, 52.8%和42.4%(P<0.01). Bel7402细胞分别为9%, 45.1%, 70.1%和56.3%(P<0.01). Western blot法检测蛋白表达抑制率, HepG2细胞分别为10.3%, 80.5%, 45.3%和39.0%(P<0.01); Bel7402细胞分别为8.3%, 40.2%, 66.4%和35.6%(P<0.01). 质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).
结论: 针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达. HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48 h和72 h抑制效果最明显.
Keywords: 短发夹状RNA; COX-2; 肝细胞癌