CD4+CD25+调节性T细胞回输对大鼠肝移植急性排斥反应的影响

Abstract

目的: 探讨回输CD4⁺CD25⁺调节性T细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的影响.

方法: 免疫磁珠阴性加阳性分选Lewis大鼠脾脏、外周淋巴结内的CD4⁺CD25⁺调节性T细胞, 分离后的细胞与丝裂霉素C处理过的DA大鼠脾细胞混合培养3 d. 淋巴细胞增殖实验评价新鲜分离和体外培养后的CD4⁺CD25⁺调节性T细胞对CD4⁺CD25^-T细胞增殖的抑制作用. 以DA大鼠为供体, Lewis大鼠为受体, 建立4组原位肝移植模型, 每组12例, 共48例. A组术后不进行任何干预; B组术后0-6 d FK506 0.2 mg/(kg•d)灌胃; C组、D组术前1 d经阴茎背静脉分别向受体回输新鲜分离、体外培养后的1×10⁶的CD4⁺CD25⁺T细胞. 术后7 d每组随机处死6只, 收集血标本作血清天冬氨酸氨基转移酶(asparate transaminase, AST)、总胆红素(bilirubin, BIL)检测, 取肝脏标本作病理学检查, 每组各留6只观察生存期.

结果: 分选后的CD4⁺CD25⁺T细胞纯度为90.2%±1.8%(86%-93%, n=10), 淋巴细胞混合培养实验中新鲜分离和体外培养后的CD4⁺CD25⁺T细胞均可抑制CD4⁺CD25^-T细胞的增殖(7 681.7±1 004.9, 6 573.3±1 722.7 cpm vs 24 918.7±2 276.3 cpm; P = 0.000, P = 0.000). 术后7 d, 新鲜细胞回输组以及体外培养细胞回输组AST低于对照组(8.1± 2.0 mkat/L vs 17.9±3.8 mkat/L, P = 0.000; 8.4±1.4 mkat/L vs 17.9 ± 3.8 mkat/L, P = 0.000), BIL亦低于对照组(45.8 ± 9.0 mmol/L vs 98.4±21.2 mmol/L, P = 0.000; 44.7±12.0 mmol/L vs 98.4±21.2 mmol/L, P = 0.000). 四组的Banff评分比较, 两组细胞回输组与对照组比较有统计学差异(P<0.05). 两组细胞回输组生存时间均大于对照组(21.7±1.7 d vs 12.8±0.5 d, P = 0.0001; 30.3±1.7 vs 12.8±0.5 d, P = 0.000 4), 体外培养细胞回输组生存时间大于新鲜细胞回输组(30.3±1.7 d vs 21.7±1.7 d, P = 0.0017).

结论: 回输新鲜分离/经供体抗原体外激活的受体CD4⁺CD25⁺调节性T细胞, 可以明显减轻大鼠肝脏移植的急性排斥反应, 延长生存期; 其中经供体抗原体外激活的CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的作用更持久.

Keywords: 细胞磁分离技术; CD4⁺CD25⁺调节性T细胞; 大鼠; 肝移植; 急性排斥反应