基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-06-08; 14(16): 1554-1560
Published online 2006-06-08. doi: 10.11569/wcjd.v14.i16.1554
抗HBsAg-Fab重组体在小鼠肝脏的表达
唐莉, 曾志贵, 潘桃, 袁劲, 陈必成, 陈忠华, 陈知水
唐莉, 曾志贵, 潘桃, 袁劲, 陈忠华, 陈知水, 华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所 国家教育部/卫生部重点实验室 湖北省武汉市 430030
陈必成, 温州医学院附属第一医院移植中心 浙江省温州市 325000
唐莉, 2001年皖南医学院本科毕业, 2006年华中科技大学同济医学院博士毕业, 主要从事移植免疫及抗体工程研究.
基金项目: 国家自然科学基金面上项目资助, No. 30471695.
通讯作者: 陈知水, 430030, 湖北省武汉市汉口解放大道1095号, 同济医院器官移植研究所. zschen@tjh.tjmh.edu.cn
电话: 027-83662592
收稿日期: 2006-03-24
修回日期: 2006-04-06
接受日期: 2006-04-13
在线出版日期: 2006-06-08
Abstract

目的: 研究人抗HBsAg-Fab重组体在小鼠体内的表达分泌.

方法: 将所构建的pXXUF1-HBs-Fab质粒以 5、10、20和40 mg的剂量分别利用尾静脉液压法转染C57BL/6小鼠, 建立实验1-4组; 同时设立pXXUF1质粒转染对照组和空白组. 转染3 d后采集血清和肝、肾、脾等组织标本, 运用RT-PCR, ELISA和免疫组织化学染色等方法从基因和蛋白水平分析基因工程抗体人抗HBsAg-Fab在体内的表达能力.

结果: 尾静脉液压注射pXXUF1-HBs-Fab组小鼠血清中证实了人源性Fab蛋白的分泌性表达, 各实验组血清中表达量分别为201.3±13.7、213.1±13.5、513.6±12.8和954.1± 12.7 mg/L, 并具有与HBsAg特异性结合的活性, 蛋白表达与注射质粒剂量有正相关(r = 0.912, P<0.01); 对照组和空白组血清中则未测到目的蛋白. 实验组肝、肾、脾组织RT-PCR检测可见肝组织中有Fd重链及k轻链的mRNA表达; 免疫组织化学检测显示肝细胞胞质中有棕黄色阳性颗粒, 且部分肾小球毛细血管腔内壁和肾脏集合管壁可见附着的Fab蛋白, 肾实质细胞及脾脏均未见Fd重链及k轻链的mRNA和目的蛋白表达; 对照组和空白组均未检测到目的蛋白.

结论: pXXUF1-HBs-Fab成功于小鼠肝脏分泌表达人抗HBsAg-Fab重组体, 其表达水平与质粒DNA注射剂量存在正相关关系, 并可通过肾小球滤过代谢.

Keywords: 真核表达; 小分子抗体; 乙肝表面抗原; 小鼠