基础研究
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世界华人消化杂志. 2006-04-18; 14(11): 1064-1070
Published online 2006-04-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i11.1064
用SEREX方法筛选HCC抗原及hcct-19表达谱的检测
陈晓红, 陈智, 陈峰, 姚航平, 夏琦, 焦婧婧
陈晓红, 陈智, 陈峰, 姚航平, 夏琦, 焦婧婧, 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所 浙江省杭州市 310003
陈晓红, 2005年浙江大学内科学博士, 现在哈尔滨医科大学第一临床医学院感染科工作, 主治医师、讲师, 主要从事病毒性肝炎及原发性肝癌发病机制的研究.
通讯作者: 陈智, 310003, 浙江省杭州市庆春路79号, 浙江大学附属第一医院传染病研究所. chenzhi@zju.edu.cn
电话: 0571-87236580
收稿日期: 2005-11-08
修回日期: 2005-12-01
接受日期: 2005-12-24
在线出版日期: 2006-04-18
Abstract

目的: 用SEREX方法鉴定HCC表达的肿瘤抗原, 检测hcct-19的表达谱.

方法: 将HCC表达文库铺板, IPTG诱导蛋白质表达, BSA封闭. 同1:1000稀释的预吸收HCC患者血清反应后, 与1:5000稀释的羊抗人抗体反应, 在BCIP/NBT的作用下显色, 挑取阳性克隆噬菌斑块, 重复筛选和铺板3次, 直至得到一致的单克隆免疫阳性重组噬菌体. 挑取阳性克隆噬菌斑, 用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增, PCR产物纯化测序, 序列结果用BLAST软件同GenBank中的已知基因进行对比分析. 检测阳性克隆抗原基因hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中的表达, 半定量RT-PCR方法检测阳性克隆抗原基因在肝癌及癌旁组织中的表达.

结果: 共得到31个阳性克隆, 代表14个不同的cDNA序列, 其中10个为已知功能的基因, 4个为未知功能的基因. 在已知功能的基因中, RFC2、NDUFA4及MCART1首次被发现与HCC有关. hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中表达, 在肝癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(13.2±2.7 vs 2.9±0.3, P < 0.05).

结论: 本实验筛选出的HCC抗原有助于进一步阐明HCC的形成过程. hcct-19可能作为一个过量表达的基因参与了HCC的发病过程.

Keywords: SEREX; 肝细胞癌; 抗原; Hcct-19; 表达谱; 人组织; 细胞株