病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2005-03-15; 13(6): 734-738
Published online 2005-03-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i6.734
抗HBc-ScFv基因复制缺陷型腺病毒载体的构建及其体外表达
汤正好, 马会慧, 臧国庆, 余永胜, 李刚, 姚集鲁
汤正好, 臧国庆, 余永胜, 上海交通大学附属第六人民医院感染科 上海市 200233
马会慧, 李刚, 姚集鲁, 中山大学附属第三医院传染科实验室 广东省广州市 510630
汤正好, 男, 1966-07-13, 安徽省黄山市人, 汉族, 2003年中山大学医学博士, 副主任医师, 主要从事病毒性肝炎的研究.
通讯作者: 汤正好, 200233, 上海市宜山路600号, 上海交通大学附属第六人民医院感染科. tzhhao@163.com
电话: 020-64369181-8673
收稿日期: 2004-12-31
修回日期: 2005-01-15
接受日期: 2005-01-20
在线出版日期: 2005-03-15
Abstract

目的: 构建表达抗乙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体(抗HBc ScFv)的复制缺陷型腺病毒载体, 并检测其能否在真核细胞中有效表达目的基因.

方法: 采用DNA重组技术将特异性人源性抗HBc单链抗体基因克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV, 与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy-1共转染BJ5183细菌, 经细菌内同源重组产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒载体pAd-ScFv, 经脂质体法转染293细胞, 包装产生携带抗HBc ScFv基因的重组腺病毒Ad-ScFv, 体外转染HepG2细胞, PCR和ELISA法检测目的基因及其表达.

结果: 构建了表达抗HBc ScFv基因的复制缺陷型腺病毒, 病毒滴度达4×1015PFU/L, 并能在真核细胞中有效表达目的基因.

结论: 成功构建表达抗HBc ScFv的复制缺陷型腺病毒载体, 为进一步开展抗HBc ScFv在抗HBV基因治疗中的作用研究提供实验基础.

Keywords: 抗HBc ScFv基因; 复制缺陷型; 重组腺病毒载体