基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-03-01; 13(5): 648-652
Published online 2005-03-01. doi: 10.11569/wcjd.v13.i5.648
HepG2细胞构成的生物人工肝脏体外氨与安定的代谢能力
王宁, 陈洋, 郭仁宣, 郭克建
王宁, 郭仁宣, 郭克建, 中国医科大学附属第一医院普外二科 辽宁省沈阳市 110001
陈洋, 中国医科大学附属第一医院中心实验室 辽宁省沈阳市 110001
王宁, 男, 1969-03-30生, 沈阳人, 汉族. 1993年毕业于大连医科大学, 现任中国医科大学附属第一医院普外二科主治医师. 2004年于日本自治医科大学获博士学位.
通讯作者: 王宁, 110001, 辽宁省沈阳市, 中国医科大学附属第一医院普外二科. wangning690330@yahoo.com.cn
电话: 024-23256666-6237
收稿日期: 2005-01-10
修回日期: 2005-01-15
接受日期: 2005-01-20
在线出版日期: 2005-03-01
Abstract

目的: 为增强HepG2细胞的氨和苯二氮 类代谢活性, 在Enosawa et al的HepG2-GS细胞基础上以转基因技术, 建立一种谷氨酰胺合成酶(glutamine sythetase, GS)和细胞色素P450 3A4(CYP 3A4)都过表达的HepG2-GS-3A4细胞. 并在人工肝脏循环器中培养此细胞, 以检测此人工肝脏的氨和安定(Diazapam, DZP)的代谢率.

方法: 以Western杂交和免疫组化等方法证实CYP 3A4蛋白过表达后, 将HepG2-GS-3A4细胞接种于一种人工肝脏循环器, 待细胞数量增至足够后, 充入含NH4Cl和安定的培养液, 孵育24 h, 定时取样, 分别以Berthelot反应法检测氨浓度, 以HPLC法检测DZP及其代谢产物.

结果: CYP 3A4蛋白在HepG2-GS-3A4细胞中表达显著强于HepG2细胞(P=0.02). 在接种有HepG2-GS-3A4细胞的生物人工肝脏循环器中与HepG2细胞和无细胞组相比, 氨浓度明显降低(P=0.04), 氨浓度约降低约31.7%; DZP浓度也明显降低(P=0.03), 且有DZP的代谢产物生成产生, DZP浓度约降低36.7%.

结论: 接种有HepG2-GS-3A4细胞的生物人工肝脏有明显的DZP和氨的代谢能力, 代谢能力虽弱于文献中的猪原代肝细胞, 但具有性质稳定, 易于传代和储存, 获取细胞数量不受限制等优点.

Keywords: 氨; 安定; 人工肝脏; HepG2细胞