修回日期: 2004-11-21
接受日期: 2004-11-29
在线出版日期: 2005-02-15
目的: 探讨EGFR信号通路对人结肠癌Caco-2细胞增生、黏附和侵袭的影响及其分子机制.
方法: 应用细胞培养技术培养Caco-2细胞; 以MTT法检测EGF, AG1478和PD98059对Caco-2细胞增生和生长的影响; Matrigel黏附实验、侵袭实验和RT-PCR技术检测EGF, AG1478和PD98059对Caco-2细胞黏附力、侵袭力和MMP-2, MMP-9, TIMP-1和TIMP-2基因转录的影响; Western blot蛋白免疫印迹法检测EGF和AG1478对Caco-2细胞P-EGFR蛋白表达的影响.
结果: 外源性EGF(10 mg/L)可明显地促进Caco-2细胞的增生和生长, 24 h细胞生长率提高了23.4%(P<0.01); 而AG1478(20mmol/L)和PD98059(40 mmol/L)则明显地抑制细胞的增生和生长, 其抑制作用没有时间效应关系, AG1478最强抑制时间为第48 h, 细胞生长率下降了45.7%(P<0.01), PD98059最强抑制时间为第72 h, 细胞生长率下降了54.6%(P<0.01). Matrigel黏附实验、侵袭实验揭示了, EGF(10 mg/L)提高EGFR活性后能明显地增加Caco-2细胞的体外黏附力(P<0.05)和侵袭力(P = 0.001); 而且AG1478和PD98059分别阻断EGFR和ERK1/2后能使EGF的促细胞黏附力和侵袭力的作用消失(P<0.01). RT-PCR测定显示, EGF能增加Caco-2细胞MMP-2, MMP-9 mRNA的表达, 同时也能减少TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达; 而AG1478和PD98059均能逆转EGF对Caco-2细胞基因的影响, 使MMP-2和MMP-9 mRNA的表达下降, TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达上升, 结果MMP-2/TIMP-2比值和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P<0.001).
结论: EGFR信号可能通过下游MAPK通路传递信息, 改变MMP-2, MMP-9, TIMP-1和TIMP-2基因功能, 从而有助于结肠癌Caco-2细胞的侵袭与转移.