基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-02-15; 13(4): 464-467
Published online 2005-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i4.464
DHFR-CD双耐药基因增强转基因小鼠对大剂量化疗毒性的抵御能力
路平, 金锋, 陈波, 姚凡, 王舒宝, 陈峻青, 徐惠绵, 赵实诚
路平, 金锋, 陈波, 姚凡, 王舒宝, 陈峻青, 徐惠绵, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科 辽宁省沈阳市 110001
赵实诚, 美国纽约Memorial Sloan-Kettering癌症中心 美国纽约 10021
路平, 男, 1964-02-13生, 安徽省萧县人, 汉族. 1998年中国医科大学博士, 副教授, 主要从事消化道肿瘤的诊治研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30471678.
通讯作者: 路平, 110001, 辽宁省沈阳市和平区南京北街155号, 中国医科大学附属第一医院肿瘤科. lupinglp1999@163.com
收稿日期: 2004-11-12
修回日期: 2004-11-22
接受日期: 2004-11-29
在线出版日期: 2005-02-15
Abstract

目的: 探讨将人双突变的二氢叶酸还原酶基因(DHFR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)同时导入小鼠骨髓细胞中, 观察小鼠对大剂量氨甲喋呤(MTX)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐受性, 研究骨髓耐受联合化疗的可行性.

方法: 以反转录病毒为载体, 将人双突变的二氢叶酸还原酶基因(DHFR)和胞苷脱氨基酶基因(CD)通过共培养转染入小鼠骨髓干细胞, 观察共培养后的骨髓细胞及受体小鼠骨髓移植后经药物处理后的骨髓细胞耐MTX及Ara-C CFU-GM生成情况; 转基因小鼠骨髓细胞提取的DNA, 用PCR检测转基因小鼠骨髓细胞耐药基因的表达; 观察转基因小鼠经大剂量MTX和Ara-C化疗后血象、体质量及生存率的变化.

结果: 骨髓移植前共培养后供体的骨髓细胞和骨髓移植后受体含有耐药基因(SFG-F/S-CD)的骨髓细胞均有耐药克隆的形成(14%, 20%; χ2分别为42.55, 44.26; P<0.01), 并明显增加了对MTX和Ara-C的耐受; 与对照组比较含双耐药基因组动物经大剂量化疗后, 生存率明显提高(χ2 = 7.42, P<0.01), 血象逐渐恢复正常; 转基因小鼠骨髓细胞经PCR检测, 显示有F/S-CD基因条带; 耐药基因转染后小鼠骨髓对MTX和Ara-C 的耐受明显增加.

结论: 双耐药基因可以进入小鼠骨髓细胞并且获得共表达, 提高了造血细胞对MTX和Aar-C的耐药性.

Keywords: 二氢叶酸还原酶基因; 胞苷脱氨基酶基因; 基因疗法