基础研究
Copyright ©The Author(s) 2005. Published by Baishideng Publishing Group Inc. All rights reserved.
世界华人消化杂志. 2005-02-15; 13(4): 452-455
Published online 2005-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i4.452
人胎肝干细胞的体外分离培养与鉴定
毛海洲, 陈耀凯, 王宇明, 张磊, 刘国栋
毛海洲, 陈耀凯, 王宇明, 张磊, 刘国栋, 中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所 重庆市 400038
毛海洲, 男, 1968-02-19生, 河南省遂平县人, 汉族, 1993年河南医科大学学士, 主治医师, 主要从事消化系统疾病临床研究, 现在河南省开封市解放军一五五医院消化科工作.
基金项目: 国家自然科学基金项目, No. 30100080; No. 30370391.
通讯作者: 陈耀凯, 400038, 重庆市, 中国人民解放军第三军医大学西南医院全军感染病研究所. yaokaichen@hotmail.com
电话: 023-68754475-8006 传真: 023-65461319
收稿日期: 2004-11-23
修回日期: 2004-12-02
接受日期: 2004-12-08
在线出版日期: 2005-02-15
Abstract

目的: 对人胎肝干细胞进行体外分离、培养与鉴定, 为其在生物人工肝及肝细胞移植方面的应用奠定基础.

方法: 取16-29周龄死产人胚胎肝脏, 参照本室建立的方法对胎肝干细胞进行分离. 所获细胞悬液用50 g反复离心, 沉淀物用F12培养液悬浮细胞; 将细胞悬液加入Percoll液进行梯度离心, 吸取50%与70% Percoll层之间的细胞层, 用Hanks液洗涤两次后离心. 将细胞团悬浮于DMEM/F12(2:1)培养液中, 接种于塑料培养瓶或六孔培养板中; 在37 ℃ 50 mL/L CO2孵箱中培养. 采用免疫组织化学法鉴定细胞表型.

结果: 原代细胞呈圆形或卵圆形, 体积明显小于肝细胞, 胞核大而胞质少, 核浆比较小, 培养中细胞生长旺盛. 培养的细胞胞质CK19, OV6及白蛋白染色均呈阳性; 部分细胞胞质同时表达白蛋白和CK19.

结论: 人胚胎肝脏中存在在肝干细胞, 这些细胞表现出不同的分化状态.

Keywords: 肝干细胞; 人胎; 免疫组化