基础研究
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世界华人消化杂志. 2005-11-28; 13(22): 2640-2644
Published online 2005-11-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i22.2640
J-HNP-1 多肽的重组及体外抗菌作用研究
刘贤华, 白晓东, 仝青英, 张韶峰
刘贤华, 仝青英, 张韶峰,中国人民武装警察部队总医院科训科中心实验室 北京市 100039
白晓东, 中国人民武装警察部队总医院烧伤整形外科 北京市 100039
刘贤华, 女, 1971-04-19生, 湖北省洪湖市人, 汉族, 1999年重庆市第三军医大学预防医学系本科毕业, 2005年重庆市第三军医大学硕士研究生毕业, 实验师, 主要从事创伤后感染预防和治疗的研究.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, No. 30100197.
通讯作者: 刘贤华, 100039, 北京市海淀区永定路69号, 北京市武警总医院科训科中心实验室. liuxianhua99student@sina.com
电话: 010-88276752 传真: 010-68211327
收稿日期: 2005-07-25
修回日期: 2005-08-10
接受日期: 2005-08-26
在线出版日期: 2005-11-28
Abstract

目的: 将α-防御素-1(HNP-1)基因与J链基因进行重组使其成为一种新的杀菌肽分子J-HNP-1, 并将其构建于能有效表达和分泌活性J-HNP-1杀菌肽的哺乳动物细胞表达系统.

方法: 应用PCR技术从不同的质粒中获得J链基因和HNP-1基因, 然后应用重组PCR技术将这两个不同的基因连接在一起而成为J-HNP-1基因. 将此基因克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中. 用脂质体转染法将此重组子导入COS-7细胞, 分别从mRNA和蛋白质水平采用RT-PCR和Western blot分析J-HNP-1的表达情况, 并体外检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性.

结果: 获得的J链基因和HNP-1基因大小分别为489和297 bp. 采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出一条约786 bp的片段, 其大小与预测相符; 采用Western blot印迹法, 用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在约Mr 24000处有强反应条带显示; 抗菌活性检测显示, 经rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1转染的COS-7细胞的可溶性蛋白和培养上清均有明显的抗菌活性, 抑菌圈的直径分别为34和43 mm.

结论: 重组J-HNP-1基因构建到哺乳动物细胞表达系统, 并体外表达, 具有抑菌作用.

Keywords: 重组PCR; 抗菌肽; J链; α-防御素-1