研究快报
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世界华人消化杂志. 2005-08-15; 13(15): 1904-1906
Published online 2005-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i15.1904
乙型肝炎病毒X蛋白上调前-X基因启动子表达活性
白桂芹, 成军, 刘妍, 刘蔚, 张树林
白桂芹, 成军, 刘妍, 刘蔚, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
张树林, 西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061
基金项目: 国家自然科学基金资助, No. C03011402, No. C30070689; 军队九、五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十、五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十、五科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真: 010-64281540
收稿日期: 2005-01-10
修回日期: 2005-03-22
接受日期: 2005-05-25
在线出版日期: 2005-08-15
Abstract

目的: 研究乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)对前-X基因启动子的调节作用, 研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.

方法: 应用聚合酶链反应(PCR)扩增HBV前X基因启动子, 以T-A克隆法, 将前-X基因启动子(promoter)的基因片段连入载体pGEM-T. 将获得的质粒pGEMT-前-X-promoter与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnI和Bgl II 双酶切后构建前-X启动子报告基因表达载体pCAT3-前-X-promoter, 以重组表达质粒pCAT3-前-X-promoter分别与pcDNA3.1空载体和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染HepG2细胞, 以转染pCAT3 basic的HepG2细胞为阴性对照, 48 h后收获细胞. 用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性, 以了解HBxAg对前X基因启动子的调节作用.

结果: 构建的报告载体pCAT3-前-X-promoter经过序列分析和酶切鉴定正确. 真核表达载体pcDNA3.1(-)-X和pCAT3-前-X-promoter共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是CAT3启动子的3.12倍, 是pCAT3-前-X-promoter的2.65倍, 是pCAT3-3.1空载体和pCAT3-前-X-promoter共转染的2.28倍.

结论: HBxAg可以上调乙型肝炎病毒基因组中前-X基因启动子的活性.

Keywords: N/A