研究快报
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世界华人消化杂志. 2005-08-15; 13(15): 1897-1900
Published online 2005-08-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i15.1897
应用抑制性消减杂交技术克隆HBV全S蛋白反式激活蛋白1的反式激活基因
白桂芹, 成军, 张树林, 刘妍, 刘蔚, 张黎颖
白桂芹, 成军, 张树林, 刘妍, 刘蔚, 张黎颖, 北京地坛医院传染病研究所 北京市 100011
张树林, 西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061
基金项目: 国家自然科学基金资助, No. C03011402, No. C30070689; 军队九、五科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队十、五科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队十、五科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 北京市100011, 北京市东城区安外大街地坛公园13号, 北京地坛医院传染病研究所. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-64481639 传真:010-64281540
收稿日期: 2005-01-10
修回日期: 2005-03-22
接受日期: 2005-05-25
在线出版日期: 2005-08-15
Abstract

目的: 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白反式激活蛋白1(CSTP1)的反式激活基因差异表达的cDNA消减文库, 克隆HBV CSTP1反式激活相关基因.

方法: 以HBV CSTP1表达质粒pcDNA3.1(-)-CSTP1转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为对照; 制备转染后的细胞裂解液, 从中提取mRNA并逆转录为cDNA, 经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组, 分别与两种不同的接头衔接, 再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR, 将产物与T/A载体连接, 构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增, 随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.

结果: 成功构建人HBV CSTP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库. 文库扩增后得到86个白色克隆, 进行菌落PCR分析, 均得到100-1 000 bp插入片段. 挑取25个含有插入片段的阳性克隆测序分析, 获得23个已知基因序列和2个未知基因. 未知基因的功能还正在研究中.

结论: 应用SSH技术成功构建了HBV CSTP1反式激活基因差异表达的cDNA消减文库. 该文库的建立为进一步阐明HBV CSTP1反式调节的靶基因及致肝病发生的分子生物学机制提供理论依据.

Keywords: N/A