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世界华人消化杂志. 2005-06-28; 13(12): 1390-1394
Published online 2005-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i12.1390
Published online 2005-06-28. doi: 10.11569/wcjd.v13.i12.1390
人白介素10重组腺相关病毒血清型2/1杂合载体的构建及转导供肝的效果
张新宇, 邰升, 王志东, 孙世波, 吴德全, 韩德恩, 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院普外一科 黑龙江省哈尔滨市 150086
姜洪池, 孙备, 哈尔滨医科大学第一临床医学院普外科 黑龙江省哈尔滨市 150086
周令望, 中国疾病控制中心地方病分中心 黑龙江省哈尔滨市 150086
张新宇, 男, 1970-03-05生, 医学博士, 副主任医师、副教授.
基金项目: 国家自然科学基金资助项目, Nos. 30100177, 30400416 .
通讯作者: 张新宇, 150086, 黑龙江省哈尔滨市, 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院普外一科. xinyuzhang3052000@yahoo.com.cn
电话: 0451-89705906
收稿日期: 2005-04-04
修回日期: 2005-04-06
接受日期: 2005-04-09
在线出版日期: 2005-06-28
修回日期: 2005-04-06
接受日期: 2005-04-09
在线出版日期: 2005-06-28
Abstract
目的: 构建含人白介素10(hIL-10)的腺相关病毒血清型2/1杂合载体(AAV2/1), 并观察其在供肝移植物中的表达.
方法: 采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞中扩增hIL-10cDNA, 将其克隆至pMD18-T载体中, 测序后, 再经酶切定向插入真核表达载体pSNAV, 用脂质体介导转染BHK21细胞, 经G418筛选得到含ITR-hIL-10-ITR的BHK21细胞株, 用携带rep2-cap1基因的辅助病毒(rHSV/r2c1)感染该细胞株.通过细胞孵育、裂解和病毒纯化, 得到含hIL-10 的AAV2/1载体.在供肝灌洗、保存中应用该重组病毒载体转染供肝移植物, 移植后检测其在移植物中的表达.
结果: RT-PCR扩增的hIL-10cDNA序列与GenBank中hIL-10cDNA序列一致, 构建了rAAV2/1- hIL-10表达载体.转染供肝移植物后可检测到hIL-10, 持续24 wk表达.移植后24 wk, 实验组供肝中hIL-10的表达比空白对照组和rAAV2/1-GFP对照组显著增高(219.15±45.83 ng/L vs 40.02, 38.64 ng/L, P<0.05).
结论: 成功构建了rAAV2/1- hIL-10表达载体系统, 并在大鼠供肝中持续表达hIL-10, 为IL-10在器官移植中的生物学作用机制及临床应用的深入研究奠定基础.
Keywords: 白介素-10; 克隆; 腺相关病毒; 供肝