肝癌
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世界华人消化杂志. 2004-09-15; 12(9): 2041-2044
Published online 2004-09-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i9.2041
抑癌基因p27Kip1及其 Ser10突变体对HepG2细胞周期和增生的影响
管晓翔, 陈龙邦, 张爱华, 王靖华, 德伟
管晓翔, 陈龙邦, 王靖华, 南京军区南京总医院肿瘤科 江苏省南京市 210002
张爱华, 南京医科大学儿童肾脏病研究中心 江苏省南京市 210002
德伟, 南京医科大学分子与生物化学中心 江苏省南京市 210002
管晓翔, 男, 1972-09-18生, 江苏省南通市人, 汉族, 2001年南京医科大学博士. 现为南京军区南京总医院博士后, 主治医师, 主要从事肝脏肿瘤发病机制的基础研究.
基金项目: 中国博士后科学基金资助项目, No. 2003034383.
通讯作者: 管晓翔, 210002, 江苏省南京市中山东路305号, 南京军区南京总医院肿瘤科. xxguan@hotmail.com
电话: 025-86062033
收稿日期: 2004-03-19
修回日期: 2004-04-09
接受日期: 2004-04-29
在线出版日期: 2004-09-15
Abstract

目的: p27kip1 氨基端第10号位置的丝氨酸(Ser10)磷酸化位点是该蛋白分子中最重要的磷酸化位点, 探讨人工诱变该位点丝氨酸为丙氨酸(S10A)后对肝癌细胞株HepG2细胞周期以及细胞增生的影响. 同时比较野生型p27kip1和Ser10突变型p27kip1基因转染对肝癌细胞株HepG2细胞周期和增生的影响.

方法: 应用脂质体转染法将含人野生型和突变型p27kip1质粒DNA瞬时转染HepG2细胞, 免疫细胞化学检测p27kip1蛋白的表达和细胞内分布, 流式细胞计数仪分析细胞周期变化.

结果: 野生型和突变p27kip1 蛋白转基因后HepG2细胞均可以G0期阻滞, 且突变型的阻滞作用强于野生型(P <0.05), 细胞生长受到抑制. 无血清培养96 h同步化于G0期, 野生型和突变型p27kip1均分布于细胞核; 而在20 mL/L血清继续培养8 h后野生型向细胞质转运而主要分布于细胞质, 突变型仍然滞留于细胞核.

结论: p27kip1 的过度表达可明显抑制HepG2细胞的增生, p27kip1Ser10磷酸化可能介导其细胞核外转运的重要分子机制.

Keywords: N/A