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大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系
张刚庆, 方驰华, 池达智, 中国人民解放军第一军医大学珠江医院普外科 广东省广州市 510282
基金项目: 广东省自然科学基金资助课题 , No. 2001010593 .
通讯作者: 方驰华, 510282, 广东省广州市, 中国人民解放军第一军医大学珠江医院普外科. zhanggq@hotmail.com
电话: 020-61643211 传真: 020-61643020
收稿日期: 2004-02-03
修回日期: 2004-02-10
接受日期: 2004-02-21
在线出版日期: 2004-08-15
修回日期: 2004-02-10
接受日期: 2004-02-21
在线出版日期: 2004-08-15
Abstract
目的: 探索成体大鼠的骨髓间充质干细胞 (MSCs)的分离、体外培养方法, 观察采用不同的换液频度与细胞增生和生长的关系, 为其应用提供实验依据.
方法: 从大鼠股骨获取骨髓, 采用梯度离心的方法进行分离, 在含10 mL/L胎牛血清的DMEM中常规培养, 以MTT法检测不同的时间换液时细胞的生长曲线, 并用碱性磷酸酶 (AKP)检测的方法对分离的细胞进行鉴定.
结果: 采用梯度离心方法分离的骨髓间质干细胞的纯度较高, 细胞活性佳, AKP染色为强阴性. 首次换液后, 每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生, 原代长满培养瓶底比每隔 2-3 d换液一次平均提前2 d.
结论: 采用梯度离心的方法分离可获得纯度较高的骨髓间质干细胞, 是简单易行的分离方法, 每天更换培养液比每隔3-4 d换液一次更有利于MSCs的增生和形成形态均一的细胞集落.
Keywords: N/A