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人HMGB1 A box和B box cDNA的克隆与表达
张艳, 何凤田, 李蓉芬, 连继勤, 杨朝辉, 高会广, 中国人民解放军第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室 重庆市 400038
张艳, 女, 1978-02-09生, 重庆市人, 汉族. 2002年中国人民解放军第三军医大学硕士研究生, 主要从事肿瘤分子生物学方面的研究.
通讯作者: 何凤田, 400038, 重庆市, 中国人民解放军第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室. tmmubiozy@yahoo.com.cn
电话: 023-68752263 传真: 023-68753462
收稿日期: 2004-03-05
修回日期: 2004-03-13
接受日期: 2004-03-18
在线出版日期: 2004-06-15
修回日期: 2004-03-13
接受日期: 2004-03-18
在线出版日期: 2004-06-15
Abstract
目的: 克隆人HMGB1中的A box (1-85 aa)和B box (88-162 aa)的cDNA, 构建重组原核表达载体并对其诱导表达, 为检测其生物学活性做准备.
方法: 提取人新鲜扁桃体组织总RNA, 经RT-PCR扩增出人 HMGB1 A box和B box 的 cDNA 序列, 并分别克隆至载体pUC19进行序列测定, 随后分别构建于高效原核表达载体pQE-80L/DHFR中, 经IPTG诱导 4 h后, 可表达Mr 约 35 000, 34 000的融合蛋白. Western Blotting鉴定所表达的目的蛋白.
结果: 经RT-PCR扩增得到了255 bp和225 bp的DNA片段, 经序列分析与GenBank中报道的已知序列完全一致, 构建了含融合蛋白的重组表达质粒, 诱导表达了目的蛋白, 经Western Blotting证实, 在Mr分别约为35 000和34 000处有两条清楚的蛋白带.
结论: HMGB1 A box和B box cDNA的克隆, 原核表达载体的构建及目的蛋白的表达鉴定, 为进一步研究HMGB1 A box和B box的生物学功能奠定了基础.
Keywords: N/A