修回日期: 2004-01-09
接受日期: 2004-02-01
在线出版日期: 2004-05-15
目的: 研究Fas表达及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)在暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure, FHF)中与肝细胞凋亡的关系.
方法: 采用脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合用药制备FHF小鼠模型; 采用免疫组化方法检测肝组织Fas表达, 分别采用ELISA方法和RT-PCR法检测血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达; 采用肝组织DNA琼脂糖凝胶电泳和TUNEL法检测肝细胞凋亡; 在用药后2, 4, 8, 12 h的不同时期动态观察Fas表达、血清TNF-α水平及肝组织TNF-αmRNA表达及肝细胞凋亡的变化, 并对模型鼠给予TNF-αmAb, 动态观察上述指标的变化.
结果: 在FHF模型小鼠中, 用药后2 h开始Fas有少量表达, 至8 h和12 h表达均很多, 二者比较无显著差异, 与2 h组比较P<0.01,与4 h组比较P<0.05. 用药后2-4 h肝组织TNF-αmRNA表达显著增加(0.91±0.75, 正常值为0.32±0.10), 伴血清TNF-α水平升高(320±87 ng/L, 正常值为17±7 ng/L), 8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现, 血清ALT和TBil水平显著增加(分别为9 352±1 000 nkat/L和163.7±34.5 mmoL/L, 正常值分别为393±134 nkat/L和14.9±4.8 mmoL/L), 12 h肝细胞坏死和凋亡同时存在, 血清ALT和TBil水平达最高峰(分别为11141±1312 nkat /L 和 203.2±19.9 mmoL/L). 给予TNF-αmAb后LPS/D-GalN介导的肝细胞凋亡和损伤被阻断, Fas表达亦被阻断.
结论: 在FHF中, TNF-α对肝细胞凋亡及肝损伤起重要的作用, 肝细胞凋亡的发生与Fas的表达增加有关.