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MAPK信号转导通路与生存素反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡的关系
付广, 王国斌, 卢晓明, 黄庆先, 郑海, 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科 湖北省武汉市 430022
付广, 男, 1971-08-30生, 辽宁省建平县人, 汉族. 1994年同济医科大学本科毕业, 2004年武汉市华中科技大学同济医学院博士毕业, 主治医师, 主要从事胃癌的机制和治疗研究.
通讯作者: 付广, 430022, 湖北省武汉市解放大道1277号, 华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科. fuguang71@hotmail.com
电话: 027-85726201 传真: 027-85776334
收稿日期: 2003-12-29
修回日期: 2004-01-09
接受日期: 2004-02-01
在线出版日期: 2004-05-15
修回日期: 2004-01-09
接受日期: 2004-02-01
在线出版日期: 2004-05-15
Abstract
目的: 探讨分裂原激活的蛋白激酶家族(MAPK)信号转导通路与脂质体生存素(survivin)反义寡核苷酸转染诱导人胃癌细胞系HS-746T凋亡的关系.
方法: 设计合成survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染胃癌HS-746T细胞, 分空白对照组, 脂质体和正义链转染组, 100, 200, 400 nmoL/L反义链转染组及P38MAPK、ERK1/2抑制剂组. 用流质细胞仪检测转染后2, 4, 8, 12, 24 and 48 h各组细胞增生和凋亡指数. 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学染色法、Western blot蛋白免疫印迹法、免疫沉淀法及激酶活性测定法检测各对照组及ASODN组转染后survivin mRNA和P38MAPK, ERK1/2, survivin蛋白表达和活性的变化.
结果: 不同时间空白组、脂质体和正义链转染组ERK1/2 , P38MAPK表达均无明显差异, 各浓度survivin ASODN转染组凋亡细胞增多, 凋亡指数高于其他对照组. P38MAPK抑制剂组凋亡细胞减少, ERK1/2抑制剂组增多. Survivin mRNA和蛋白表达随着转染浓度的增加而降低. 磷酸化和非磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinasel/2, ERKl/2)的表达随药物浓度增加而减弱. P38MAPK的表达在各组均相同, 但ASODN转染组活性增高.
结论: Survivin基因反义寡核苷酸在体外可能通过MAPK信号转导通路激活凋亡相关的信号途径P38MAPK, 阻断与细胞增生相关的信号途径ERK1/2来诱导胃癌细胞凋亡, 抑制人胃癌细胞的增生.
Keywords: N/A