病毒性肝炎
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世界华人消化杂志. 2004-04-15; 12(4): 847-850
Published online 2004-04-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i4.847
应用抑制性消减杂交技术克隆HCV NS3蛋白反式激活基因2的上调基因
党晓燕, 成军, 邓红, 王建军, 杨倩, 刘妍, 纪冬, 王春花
党晓燕, 邓红, 陕西西安交通大学第二医院感染科 陕西省西安市 710004
成军, 王建军, 杨倩, 刘妍, 纪冬, 王春花, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
党晓燕, 女, 陕西省人, 医师, 陕西西安交通大学2001年内科传染病学硕士学位研究生, 主要从事内科传染病的临床工作和病毒性肝炎的实验研究.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689; 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063; 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138; 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135.
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-11-13
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
Abstract

目的: 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库, 克隆HCV NS3蛋白反式激活相关基因.

方法: 以HCV NS3表达质粒pcDNA3.1(-)-NS3转染HepG2细胞, 以空载体pcDNA3.1(-)为对照; 制备转染后的细胞裂解液, 从中提取mRNA并合成cDNA, 经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组, 分别与两种不同的接头衔接, 再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR, 将产物与T/A载体连接, 构建cDNA消减文库, 并转染大肠杆菌进行文库扩增, 随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.

结果: 成功构建人HCV NS3蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库. 文库扩增后得到61个白色克隆, 进行菌落PCR分析, 均得到100-1 000 bp插入片段. 挑取30个插入片段测序分析, 得到30个已知功能基因序列.

结论: 筛选到的cDNA全长序列, 包括一些与细胞生长调节、物质代谢、免疫及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因, 推测了NS3TP2可能存在的调控机制的线索.

Keywords: N/A