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丙型肝炎病毒NS5A蛋白上调NS3TP6基因启动子表达活性的研究
洪源, 杨倩, 成军, 刘妍, 王建军, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
洪源, 男, 1974-12, 福建省莆田市人, 汉族. 1998年毕业于第四军医大学军医系, 获医学学士学位, 2003年毕业于解放军军医进修学院, 获得内科传染病学硕士学位, 主要课题方向是肝炎病毒与肝细胞相互作用的分子生物学机制.
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目 , No. C03011402, No. C30070689 ; 军队"九、五"科技攻关项目 , No. 98D063 ; 军队回国留学人员启动基金项目 , No. 98H038 ; 军队"十、五"科技攻关青年基金项目 , No. 01Q138 ; 军队"十、五"科技攻关面上项目 , No. 01MB135 .
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933392 传真: 010-63801283
收稿日期: 2003-11-13
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
修回日期: 2003-12-01
接受日期: 2003-12-16
在线出版日期: 2004-04-15
Abstract
目的: 探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对NS3TP6启动子转录的激活作用.
方法: 以我实验室前期研究中得到的HCV NS5A/NS3的基因表达谱芯片结果为基础, 利用生物信息学技术确定NS3TP6的启动子区域(NS3TP6-p), 聚合酶链反应(PCR)扩增NS3TP6-p, 克隆至真核报告载体pCAT3中, 构建pCAT3-NS3TP6-p报告载体; 以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系, 用酶联免疫黏附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性; 并与pcDNA3.1(-)-NS5A共转染HepG2细胞系, 用ELISA法检测CAT的表达活性.
结果: 限制性内切酶消化和序列分析结果表明, 构建的NS3TP6-p指导的报告基因表达载体pCAT3-NS3TP6-p正确无误. pCAT3-NS3TP6-p在HepG2细胞中能够启动CAT的表达; 共转染实验中pCAT3-NS3TP6-p+pcDNA3.1(-)-NS5A组CAT的表达活性是pCAT3-NS3TP6-p单独转染试验的1.87 倍.
结论: 我室克隆的NS3TP6启动子有指导下游基因转录表达的活性; HCV的NS5A蛋白具有对NS3TP6基因启动子的转录具有反式激活作用. 本实验进一步验证了我室利用基因表达谱技术研究HCV NS5A蛋白反式激活作用的结果, 为进一步阐明丙型肝炎病毒非结构蛋白5A的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
Keywords: N/A