肝癌
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世界华人消化杂志. 2004-02-15; 12(2): 283-285
Published online 2004-02-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i2.283
小鼠AFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建及鉴定
田耕, 易继林
田耕, 易继林, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科 湖北省武汉市 430030
田耕, 男, 1971-03-18生, 陕西省宝鸡市人, 汉族, 博士, 主治医师. 主要从事肝脏肿瘤的研究.
通讯作者: 田耕, 430030, 湖北省武汉市汉口解放大道1095号, 华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科. geng_tian707@hotmail.com
电话: 027-83663402
收稿日期: 2003-06-30
修回日期: 2003-08-20
接受日期: 2003-10-07
在线出版日期: 2004-02-15
Abstract

目的: 克隆小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因并构建小鼠甲胎蛋白-细胞毒性T淋巴细胞抗原4(mAFP-CTLA4)融合蛋白真核表达载体.

方法: 从Hepa1-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR, 扩增出mAFP基因, 亚克隆于pcDNA3.1载体. PCR法从质粒pmCTLA4-Ig中克隆出mCTLA4膜外部分基因并通过重叠PCR法添加接头, 重组连接于pmAFP质粒中mAFP基因后, 转化大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆酶切、测序鉴定. 用质粒瞬时转染CHO细胞, Western blot检测融合蛋白的表达.

结果: 利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1.8 kb的mAFP基因; 重组阳性克隆经酶切鉴定证实连有接头的CTLA4膜外部分基因已正确插入pmAFP质粒中, 测序结果证实各片段连接方向及阅读框正确. 用质粒瞬时转染CHO细胞, Western blot检测到预计大小分子量蛋白的表达.

结论: mAFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建成功, 为进一步研究其在肝癌免疫治疗中的作用奠定了基础.

Keywords: N/A