研究快报
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世界华人消化杂志. 2004-12-15; 12(12): 2880-2882
Published online 2004-12-15. doi: 10.11569/wcjd.v12.i12.2880
酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因
蔺淑梅, 陈天艳, 成军, 王琳, 梁耀东, 李克, 张树林
蔺淑梅, 陈天艳, 成军, 王琳, 梁耀东, 李克, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室 北京市 100039
张树林, 西安交通大学第一医院传染科 陕西省西安市 710061
基金项目: 国家自然科学基金攻关项目, No. C03011402, No. C30070689, 军队"九、五"科技攻关项目, No. 98D063, 军队回国留学人员启动基金项目, No. 98H038, 军队"十、五"科技攻关青年基金项目, No. 01Q138, 军队"十、五"科技攻关面上项目, No. 01MB135
通讯作者: 成军, 100039, 北京市西四环中路100号, 中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心, 全军病毒性肝炎防治研究重点实验室. cj@genetherapy.com.cn
电话: 010-66933391 传真: 010-63801283
收稿日期: 2004-05-28
修回日期: 2004-08-25
接受日期: 2004-09-30
在线出版日期: 2004-12-15
Abstract

目的: 用酵母双杂交技术筛选白细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白结合蛋白的基因.

方法: 用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV核心蛋白编码基因, 连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒, 转化酵母细胞AH109并在其内表达, 然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合, 在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落, 增菌后提出质粒, 转化入大肠杆菌(DH5α), 提出质粒并测序, 进行生物信息学分析.

结果: 成功克隆出HBV核心蛋白编码基因并在酵母细胞中表达, 配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落17个, 其中肿瘤高甲基化1基因3个, 编码线粒体蛋白的DNA聚合酶γ基因1个, 乙酰辅酶A合成酶3基因1个, 假定翻译起始因子基因1个, 趋化因子受体5基因1个, 线粒体核糖体蛋白L41基因1个, Kyot结合蛋白基因1个, Ran结合蛋白基因1个, 真核细胞翻译延伸因子2基因2个, 未知基因5个.

结论: 成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白的结合蛋白, 为进一步研究HBV 核心蛋白在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供了新线索.

Keywords: N/A